Effects of ovarian reserve on primordial follicle activation and early follicular growth in cattle

卵巢储备功能对牛原始卵泡激活和早期卵泡生长的影响

• 批准号: 20K15672
• 负责人: 坂口 謙一郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-12-19 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K15672/
• 关键词: 卵巣予備能; 原始卵胞活性化; 二次卵胞; 体外発育培養; 牛; 卵胞; In vitro growth (IVG)

卵巣内の原始卵胞数は、卵子の受精能や性ステロイドホルモン分泌に関わる卵巣の潜在的能力 (卵巣予備能) と相関し、ヒトや牛の繁殖能力の指標となる。しかし、卵巣予備能が原始卵胞の卵胞発育への動員 (原始卵胞活性化) や、卵胞腔形成前の初期卵胞の発育に及ぼす影響は不明である。本研究は、牛卵胞の体外発育培養 (IVG) 技術を用いて、卵巣予備能が原始卵胞活性化と初期卵胞の発育に及ぼす影響を明らかにし、得られた結果を元に、発生能の高い卵子を生産可能なIVG系を開発することを目的として以下の検討を行った。1)既報に基づき、牛の原始卵胞および二次卵胞のIVGを実施したところ、原始卵胞のIVGでは卵巣組織中に含まれる二次卵胞数は培養後に増加し、二次卵胞のIVGでは、培養後に卵胞直径が増大した。2)培養系が確立できたため、胞状卵胞数が多い牛 (n=12) および胞状卵胞数が少ない牛 (n=12) から左右の卵巣を採取し、原始卵胞のIVGを実施した。これらの卵巣組織は固定・包埋済みであり、今後組織学的な評価を実施する。3)二次卵胞のIVGにおいて、胞状卵胞数が多い牛由来の卵巣からは3.0 ± 2.0個 (平均値 ± 標準偏差) の二次卵胞が採取されたが、胞状卵胞数が少ない牛由来の卵巣からは 0.6 ± 0.9個の二次卵胞しか採取できず、安定して実験を遂行する上では、二次卵胞の採取法を改良する必要があることが示唆された。4)使用済み培養液を用いて、卵子から分泌され、卵子発育に必須な成長因子である成長分化因子-9 (GDF-9) や骨形成タンパク質-15 (BMP-15) が市販のELISAキットにより評価可能かを検証した。GDF-9は全ての検体で測定可能であったが、BMP-15は検出されない検体が多数みられた。今後、免疫組織化学を用いた半定量的解析などの異なる手法を用いて定量が可能かを検証する。

Egg 巣 の primordial follicle number は, an egg can の fertilization や ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン secretion に masato わ る eggs 巣 の potential ability (egg 巣 can reserve) と phase masato し, ヒ ト や cattle の reproducing の index と な る. し か 巣 し, eggs can reserve が primordial follicle の follicle 発 yukon へ の mobilization (primordial follicle activity) before や, egg cell to form early の follicle の 発 yukon に and ぼ す influence は unknown で あ る. This study は, cattle follicle の を 発 education training (IVG) technology using in vitro い 巣 て, eggs can reserve が primordial follicle activeness と early follicle の 発 yukon に and ぼ す influence を Ming ら か に し, ら れ た results can を yuan に, 発 の high を い eggs production may な IVG started を 発 す る こ と を purpose と し て following の 検 line for を っ た. 1) both reported に づ き, cattle の primordial follicle お よ び secondary follicle の IVG を be applied し た と こ ろ, primordial follicle の IVG で 巣 organization に は eggs contain ま れ る secondary follicle number は に raised after add し, secondary follicle の IVG で は, training after に follicle diameter が raised large し た. 2) education department が establish で き た た め, cellular follicle number が い more cows (n = 12) お よ び cellular follicle number less が な い cattle (n = 12) か ら の eggs around 巣 を し, primordial follicle の IVG を be applied し た. <s:1> れら the <s:1> fixation and embedding of the ovial tissue みであ, the な evaluation of the histology in the future 価を implementation する. 3) secondary follicle の IVG に お い て, cellular follicle number が い bovine origin の more eggs 巣 か ら は 3.0 + / - 2.0 (average numerical + standard deviation) for the secondary follicle の が take さ れ た が, less number of cellular follicle が な い bovine origin の eggs 巣 か ら は plus or minus 0.6 0.9 の secondary follicle し か take で き ず, stable し て be 験 を carries out す る on で は, secondary follicle の take method modified す を る necessary が あ る こ と が in stopping さ れ た. 4) use 済 を み broth with い て, egg か ら secretion さ れ, eggs 発 に must な growth factor で あ る growth differentiation factor 9 (GDF - 9) や bone formation タ ン パ ク mass - 15 (BMP - 15) が city vendor の ELISA キ ッ ト に よ り may review 価 か を 検 card し た. GDF - 9 は full て の 検 body で determination may で あ っ た が, BMP - 15 は 検 out さ れ な い 検 body が most み ら れ た. In the future, immunohistochemical を い た semi-quantitative analytical な ど の different な る gimmick を with い て quantitative が may か を 検 card す る.

项目成果

暑熱が乳牛の初期胞状卵胞に由来する卵子の発育, 成熟および顆粒層細胞の性ステロイドホルモン産生能に及ぼす影響

热对奶牛早期窦卵泡卵发育和成熟的影响以及颗粒细胞产生性类固醇激素的能力

• 发表时间: 2020
• 作者: 河野 光平;坂口 謙一郎;古川 瑛理;Madalitso Chelenga;栁川 洋二郎;片桐 成二
• 通讯作者: 片桐 成二

牛卵巣内の主席卵胞と黄体の存在が初期胞状卵胞由来卵子の核成熟能と顆粒層細胞の性ステロイドホルモン産生能に及ぼす影響

牛卵巢中优势卵泡和黄体的存在对早期窦卵母细胞核成熟能力和颗粒细胞产生性类固醇激素能力的影响

• 发表时间: 2020
• 作者: 坂口 謙一郎;河野 光平;栁川 洋二郎;片桐 成二;永野 昌志
• 通讯作者: 永野 昌志

Astaxanthin supplementation during 8-days of IVG culture under different oxygen tensions promotes developmental competence of bovine oocytes derived from early antral follicles

不同氧张力下IVG培养8天期间补充虾青素可促进早期窦卵泡来源的牛卵母细胞的发育能力

• 发表时间: 2020
• 作者: Madalitso Chelenga;坂口 謙一郎;古川 瑛理;栁川 洋二郎;片桐 成二;永野 昌志
• 通讯作者: 永野 昌志

Effect of increased oxygen availability and astaxanthin supplementation on the growth, maturation and developmental competence of bovine oocytes derived from early antral follicles

• DOI: 10.1016/j.theriogenology.2020.07.023
• 发表时间: 2020-11-01
• 期刊: THERIOGENOLOGY
• 影响因子: 2.8
• 作者: Chelenga, Madalitso;Sakaguchi, Kenichiro;Nagano, Masashi
• 通讯作者: Nagano, Masashi

Plasma sex steroid hormone profiles after a single dose of epidural administration of follicle-stimulating hormone via caudal vertebrae in cattle

通过牛尾椎单剂量硬膜外注射促卵泡激素后的血浆性类固醇激素谱

• 发表时间: 2021
• 作者: 1)Sakaguchi K;Yanagawa Y;Ninpetch N;Kawano K;Suda T;Yoshioka K;Katagiri S;Nagano M
• 通讯作者: Nagano M