新たな天然物ソースとしての気生シアノバクテリア

前年度に、有用物質生産株の大量培養方法と有用物質の生産誘導方法を確立できた。この大量培養方法は中規模での培養を繰り返すことで大量の藻体を得ることができるものである。繰り返し培養を行う必要があることから、この2つの技術を組み合わせるためには有用物質の生産誘導の再現性が高い必要がある。このため、まず初めに藻体の培養と有用物質の誘導を中規模のスケールで行い、これを複数回繰り返して行った。得られた藻体から有機物を抽出し、ODSカラムクロマトグラフィーによる粗精製を行った。粗精製により得られたフラクションを用いて、HeLa細胞に対する増殖阻害活性試験を行ったところ、再現性よく同じフラクションに同程度の活性(50%阻害濃度が30 mg/L程度)が得られた。このため、前年度に確立した大量培養方法と有用物質の生産誘導方法を組み合わせることに問題がないと判断し、培養スケールの拡大を行った。合計50L培養を行い、同様に粗精製を行ったところHeLa細胞に対する50%阻害濃度が34 mg/Lのフラクションが119.1 mg得られた。そこで、活性の確認されたフラクションをさらにHPLCによって精製したが、得られた活性物質の量が少ないため構造決定には未だ至っていない。また、培養のロットごとに異なるフラクションに活性が確認されたことから、1種類の気生シアノバクテリア培養株が複数種類の生物活性物質を生産できることを示唆する結果が得られた。気生シアノバクテリアの生物活性物質生産能の高さが明るみになった一方、生産する生物活性物質の種類が安定しないことが得られた活性物質の量が少ない直接的な原因となっており、生物活性物質の安定供給という点においては課題の残る結果となった。

前年度に、有用物質生産株の大量培養方法と有用物質の生産誘導方法を確立できた。この大量培養方法は中規模での培養を繰り返すことで大量の藻体を得ることができるものである。繰り返し培養を行う必要があることから、この2つの技術を組み合わせるためには有用物質の生産誘導の再現性が高い必要がある。このため、まず初めに藻体の培養と有用物質の誘導を中規模のスケールで行い、これを複数回繰り返して行った。得られた藻体から有機物を抽出し、ODSカラムクロマトグラフィーによる粗精製を行った。粗精製により得られたフラクションを用いて、HeLa細胞に対する増殖阻害活性試験を行ったところ、再現性よく同じフラクションに同程度の活性(50%阻害濃度が30 mg/L程度)が得られた。このため、前年度に確立した大量培養方法と有用物質の生産誘導方法を組み合わせることに問題がないと判断し、培養スケールの拡大を行った。合計50L培養を行い、同様に粗精製を行ったところHeLa細胞に対する50%阻害濃度が34 mg/Lのフラクションが119.1 mg得られた。そこで、活性の確認されたフラクションをさらにHPLCによって精製したが、得られた活性物質の量が少ないため構造決定には未だ至っていない。また、培養のロットごとに異なるフラクションに活性が確認されたことから、1種類の気生シアノバクテリア培養株が複数種類の生物活性物質を生産できることを示唆する結果が得られた。気生シアノバクテリアの生物活性物質生産能の高さが明るみになった一方、生産する生物活性物質の種類が安定しないことが得られた活性物質の量が少ない直接的な原因となっており、生物活性物質の安定供給という点においては課題の残る結果となった。