近位ビオチンラベル法を用いた核内構造体の動作機構の解明

利用近端生物素标记法阐明核结构的运行机制

• 批准号: 21K15012
• 负责人: 栗原 美寿々
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15012/
• 关键词: 非膜オルガネラ; 近位ビオチンラベル; 核内構造体; APEX; 天然変性ドメイン

近年、特定の立体構造を取らないタンパク質の天然変性ドメインが、微弱な分子間相互作用によって、核小体やPML bodyをはじめとした「非膜オルガネラ」の形成を制御しているのではないかという考え方が大きな注目を浴びている。非膜オルガネラの形成機構に関する情報が急速に蓄積しつつある一方で、これらの非膜オルガネラがどのようにしてその分子機能を発揮しているのかについての情報は、実は非常に限られているのが現状である。その大きな理由の一つが、天然変性ドメインが仲介する一つ一つの相互作用があまりにも微弱であるために、古典的な免疫沈降や生化学的な複合体精製などの手法ではその相互作用の対象となる分子の全容を明らかにすることができなかったという技術的な限界が挙げられる。本研究では、微弱かつ一過的な分子間相互作用でも高感度で検出することが可能な近位ビオチンラベル法を用い、代表的な非膜オルガネラであるPML bodyと相互作用する分子を明らかにする。昨年度はPML bodyの構造体に含まれる因子を同定するため、PML遺伝子座にAPEXを挿入した細胞株を用いて実験を行なったが、本細胞でのビオチン化効率が悪いことが判明した。そこで新たにPML-APEXを安定発現する細胞の作成を行い構造体因子の同定を行う。

In recent years, specific three-dimensional structures have been selected from the natural variety of molecules, weak molecular interactions, nucleosomes and PML bodies, and the formation of "non-membrane" has been controlled. The information related to the formation mechanism of non-membrane production is rapidly accumulated, and the information related to the development of molecular functions of non-membrane production is extremely limited. The interaction between natural and natural factors is weak, classical immune sedimentation and biochemical complex refinement. The interaction between natural and natural factors is complete. The interaction between molecules is limited. In this study, the molecular interaction between molecules with weak and weak molecular interaction was detected with high sensitivity. The molecular interaction between molecules with weak and weak molecular interaction was detected with high sensitivity and high sensitivity. The PML gene construct contains the same factors as APEX, and the PML gene construct contains the same factors as APEX. The new PML-APEX is stable and the construction of the construct factor is stable.

项目成果

Uncovering the role of nuclear domain in gene expression

揭示核结构域在基因表达中的作用

• 发表时间: 2023
• 作者: Yamada Akihiro;Toya Hikaru;Tanahashi Mayuko;Kurihara Misuzu;Mito Mari;Iwasaki Shintaro;Kurosaka Satoshi;Takumi Toru;Fox Archa;Kawamura Yoshimi;Miura Kyoko;Nakagawa Shinichi;栗原美寿々
• 通讯作者: 栗原美寿々

核内高次構造の構築原理と機能

核高阶结构的构建原理及作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Yamada Akihiro;Toya Hikaru;Tanahashi Mayuko;Kurihara Misuzu;Mito Mari;Iwasaki Shintaro;Kurosaka Satoshi;Takumi Toru;Fox Archa;Kawamura Yoshimi;Miura Kyoko;Nakagawa Shinichi;栗原美寿々;栗原美寿々;栗原美寿々
• 通讯作者: 栗原美寿々