リボソームストークをハブとする翻訳関連因子プールの機能動態解明

以核糖体茎为中心阐明一系列翻译相关因子的功能动力学

• 批准号: 21K15015
• 负责人: 今井 大達
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15015/
• 关键词: 翻訳; リボソーム; リボソームストーク; 近位依存ビオチン標識法

本研究ではリボソームと翻訳因子の結合・解離サイクルを駆動するリボソームストークをハブとして形成される翻訳因子プールについて、その構成因子を明らかにする。また各因子とストークの結合・解離動態を明らかにする。2023年度は (a) コントロールとして用いるMBP 安定発現細胞の作製と (b) 近位依存ビオチン標識タンパク質の濃縮および質量分析によるビオチン標識タンパク質の同定を行った。(a) Flp-In 293細胞を親株とし、近位依存ビオチン標識法のコントロールとして用いるMBP-uID安定発現細胞を樹立した。昨年度樹立したP0-uID発現細胞株と同様、ドキシサイクリン依存的に細胞質でMBP-uIDの発現が誘導され、ビオチン依存的に細胞中のタンパク質がビオチン標識されることを確認した。(b) P0-uID発現細胞とMBP-uID発現細胞のそれぞれで近位依存ビオチン標識を行い、化学修飾によりトリプシン耐性をもたせたストレプトアビジンビーズを用いてビオチン標識タンパク質を濃縮後、トリプシン消化によってビオチン標識タンパク質由来のペプチドを溶出した。LC-MS/MSとMaxQuantソフトウェアを用いて、各サンプルからビオチン標識されたと予想されるタンパク質を同定した。3 biological replicatesを用いた解析から、P0-uIDで標識されたタンパク質を120種類、MBP-uIDで標識されたタンパク質を218種類同定した。P0-uIDで最も標識されたタンパク質はP0、MBP-uIDで最も標識されたタンパク質はMBPであった。P0-uIDによる近位依存ビオチン標識実験では、リボソームストークと直接結合することが知られている既存の翻訳因子がすべて検出されたことから、確立した実験手法によりリボソームストーク近傍に存在するタンパク質を同定できていることが期待された。

In this study, we found that the combination and dissociation of the transformation factors and the formation of the transformation factors and the formation factors of the transformation factors were clearly explained. The combination and dissociation of various factors In 2023, we will conduct (a) identification of MBP stable development cells and (b) identification of proximal dependence on quality and concentration and quality analysis. (a)Flp-In 293 cells were identified by MBP-uID, which was used to establish stable cells. The expression of MBP-uID in the cytoplasm of the same cell line and the dependent cell line was confirmed last year. (b)P0-uID-producing cells and MBP-uID-producing cells are characterized in that they are proximally dependent on the identity of the cell, chemically modified, resistant, and used to extract the identity of the cell, concentrated, digested, and derived from the identity. LC-MS and MaxQuant software are used to identify the quality of each service. 3 biological replicas are used to analyze, P0-uID to identify, 120 types, MBP-uID to identify, 218 types P0-uID is the most important identifier for P0, MBP-uID is the most important identifier for MBP. P0-uID is a close dependency on the identity of the entity. It is a direct combination of the identity of the entity and the identity of the entity.

项目成果

Recruitment of translation factors by the tentacles of ribosomes

核糖体触手招募翻译因子

• DOI: 10.14952/seikagaku.2022.940739
• 发表时间: 2022
• 期刊: 生化学
• 作者: Imai Hirotatsu;Utsumi Daisuke;Torihara Hidetsugu;Takahashi Kenzo;Kuroyanagi Hidehito;Yamashita Akio;今井 大達
• 通讯作者: 今井 大達

High-speed AFM visualizes translational GTPase factor pool formed around the ribosomal P-stalk

高速 AFM 可视化核糖体 P 柄周围形成的翻译 GTP 酶因子池

• 发表时间: 2022
• 作者: 今井 大達;内海 利男;古寺 哲幸
• 通讯作者: 古寺 哲幸

The flexible N-terminal motif of uL11 unique to eukaryotic ribosomes interacts with P-complex and facilitates protein translation.

• DOI: 10.1093/nar/gkac292
• 发表时间: 2022-05-20
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Yang, Lei;Lee, Ka-Ming;Yu, Conny Wing-Heng;Imai, Hirotatsu;Choi, Andrew Kwok-Ho;Banfield, David K.;Ito, Kosuke;Uchiumi, Toshio;Wong, Kam-Bo
• 通讯作者: Wong, Kam-Bo