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細胞内共生藻の光合成産物供給が宿主の性質に与える影響の解析

内共生藻类光合产物供给对寄主特性的影响分析

基本信息

批准号：
21K15148
负责人：
柴田あいか
金额：
$ 2.91万
依托单位：
University of Tsukuba (2022)Ritsumeikan University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き、エレクトロポレーション法を用いた共生クロレラへの物質導入の検討を行った。細胞への導入効率を評価するために蛍光物質（FITC-デキストラン）をエレクトロポレーション法で細胞内に導入した。その結果、FITC-デキストランはその分子量に関わらず、細胞への導入効率が非常に高く、ほとんどの細胞が蛍光ラベルされた。このため核酸またはタンパク質導入時の効率を評価するのに適切な実験系であるかは疑わしい。しかし、細胞質を効率よく蛍光標識する方法としては有用だと考えており、宿主細胞内での共生クロレラの動態を観察する方法の一つとして利用できると考えている。今後はクロレラの分裂回数に伴って蛍光量が減少していく様子を定量する予定である。その他に、リコンビナントCas9タンパク質/ガイドRNA複合体を導入することによるゲノム編集実験系の構築を目指した。Adenine phosphoribosyltransferase遺伝子をターゲットとし、ノックアウト株を2-Fluoroadenineによって選抜する方法を試した。その結果、擬陽性株が多くあらわれ、薬剤選抜の方法に改良が必要であると考えられた。また、ミドリゾウリムシ宿主の光運動反応を共生クロレラが制御するメカニズムについて明らかにするため、ミドリゾウリムシの光運動反応を繊毛の運動変化に注目して観察を行った。ミドリゾウリムシが感知できない遠赤色光を観察光として用いたハイスピードカメラでの観察や、トラップした１細胞での光刺激の有無による繊毛の運動変化の観察を試みたが、十分なデータを得るに至っていない。ゾウリムシは細胞全体に繊毛を持つため、すべての繊毛の運動を同時に解析することは難しい。そのため、光の有無によって細胞運動が変化するときに繊毛運動が細胞のどの部分で起こっているのかをまず先に明らかにすることが必要であることが分かった。

In the past year, the introduction of new materials into China has been discussed. Evaluation of the efficiency of cellular introduction of fluorescent substances (FITC) into cells The results showed that FITC-DNA was very sensitive to molecular weight, and the efficiency of cellular DNA was very high. The efficiency of nucleic acid introduction is evaluated in the appropriate system. This is a useful way to efficiently identify the cytoplasm and observe the dynamics of symbiotic processes in host cells. In the future, the number of split loops will be reduced and the amount of light will be determined. The introduction of Cas9 RNA complexes into the genome and the construction of the genome system were directed. Adenine phosphoryltransferase is a novel enzyme for 2-Fluoroadenine. It is necessary to improve the method of selecting the positive and negative strains. The host's light motion reaction is symbiotic, and the host's light motion reaction is controlled. The host's light motion reaction is observed. The color of the hair changes when the light is stimulated. The color of the hair changes when the light is stimulated. All the hair in the cell is separated from each other, and the movement of the hair is analyzed simultaneously For example, if a cell moves, it is necessary for the cell to move.