喀痰からクラリスロマイシン耐性非結核性抗酸菌を直接検出する等温増幅法の開発

建立直接检测痰中克拉霉素耐药非结核分枝杆菌的等温扩增方法

基本信息

批准号：
21K15295
负责人：
稲垣孝行
金额：
$ 3万
依托单位：
Meijo University (2022)Nagoya University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、遺伝子変異検出法であるARMS法及び等温遺伝子増幅法であるLAMP法を応用し、クラリスロマイシン耐性の有無を喀痰から直接DNAを抽出し、喀痰検体提出から数時間で特殊な機器が必要なく薬剤耐性の有無を判定するARMS-LAMP法を開発することを目的としている。令和4(2022)年度の研究実施計画は、肺MAC症患者由来喀痰検体の収集方法の確立である。以下の研究成果が得られた。新型コロナウイルス感染症の拡大による影響で、大幅な制限が生じており、昨年度末に名古屋大学医学部附属病院における生命倫理審査委員会の承認を得た（承認番号：2021-0471）後、名古屋大学医学部附属病院医療技術部・臨床検査部門・微生物検査室において臨床検査で不要となった残余検体の登録を開始した。2021年12月から2023年1月末現在にて39検体を登録した。検体材料は、喀痰26検体、気管支洗浄液9検体、気管内吸引痰3検体、生検材料1検体であった。塗抹検査については、蛍光法を用いて染色した。塗抹陽性検体10検体、塗抹陰性検体29検体であった。MGITによる培養検査結果について、培養陽性になるまでの判定日数は平均して10.8±3.9日であった。培養後PCRにて、Mycobacterium aviumと判定された検体は26検体、Mycobacterium intracellulareと判定された検体は13検体であった。培養後ブロスミックNTMを用いたクラリスロマイシンの薬剤感受性試験の結果、全ての検体で感受性を示した。このうち、最小発育阻止濃度0.5μg/mLを示す株が最も多く16検体であった。

这项研究旨在开发一种使用ARM方法，一种遗传突变检测方法和一种等温基因扩增方法的臂方法，以直接从痰液中提取DNA来确定是否存在Clarithromycin耐药性，并确定是否在几个小时的Sputum Spifimens spiffum spiffum spiffum spiffum spifsimens spripimens spripimens spripimens spripimens spripimens commissiments抗药性中是否存在耐药性。 2022年的研究实施计划是建立一种从肺MAC疾病患者那里收集痰液标本的方法。获得了以下研究结果：由于Covid-19的传播，受到了重大限制，并在去年年底获得了Nagoya大学医学院医院医学院的生物伦理学审查委员会的批准（批准编号：2021-0471）后，该公司就不再需要在医学学院进行临床研究，并在医学学院进行了临时性研究，及其临床学院的临床研究，及其临床研究。医学医院。截至2021年12月至2023年1月底，已经注册了39个标本。标本材料是26个痰液标本，9个样本的支气管灌洗样本，3个气管内抽吸样本和1个活检标本。使用荧光染色。有10个正涂片样品和29个负涂片样品。对于使用MGIT进行培养测试结果的阳性培养前确定的天数为10.8±3.9天。培养后，通过PCR确定26个标本为鸟分枝杆菌，并确定13个标本为分枝杆菌。培养后，使用肉体NTM对Clarithromycin的药物敏感性测试在所有标本中均显示敏感性。其中，16个标本是最丰富的菌株，最小抑制浓度为0.5μg/ml。