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脱細胞化骨を用いた、新しい人工ヒト骨髄およびヒト骨髄異形成症候群モデルの作成

利用脱细胞骨创建新型人工骨髓和人类骨髓增生异常综合征模型

基本信息

批准号：
21K15414
负责人：
大西威一郎
金额：
$ 3万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度は、ヒト骨髄間葉幹細胞株UE7T-9細胞の脱細胞化骨への進展因子として、CRISPR activation library(SAM library))で同定したSHC4について、SHC4過剰発現細胞株のRNA sequence 解析を施行し、Cell motilityに関する因子の発現亢進を得た。この成果については、Bioengineering誌に報告した。CRISPR knock out library(GeCKO v2 library)で同定したSRRM4については、SRRM4 Knock out(KO) UE7T-9細胞株をCRISPR lenti v2にて作成し、限界希釈からのcloningを行なった。完全なKO細胞株は樹立できなかったものの、部分的なKOは確認できた細胞株を樹立した。増殖能の評価(MTS assay), 移動能の評価(Scratch assay)、足場非依存性(Soft agar assay)を行ない、SRRM4KO細胞株では、対照群と比較して、増殖能には変化がなかったが、移動能の亢進と、足場非依存性の増殖が認められた。また脱細胞化骨への進展も、確認された。RNA sequence 解析では、Extracellular matrixやCytokine activityに関する因子の発現亢進を得た。SRRM4に関する結果についても、論文投稿の準備を進めている。2022年度は、上記樹立細胞株の、脱細胞化骨への進展、生着率が著明に低下しており、細胞のcloningなどをやり直ししたが、生着率の改善に乏しかった。その原因として、2022年度に使用した脱細胞化骨について、生理食塩水下で長期保存により、品質として劣化した可能性が考えられる。今後は用いる脱細胞化骨の都度作製なども検討する。また、マウス皮下への移植も進める。

In the year of 2022, the cell lines of UE7T-9 were decytified with progressive factor assays, CRISPR activation library (SAM library) was the same as that of SHC4, and SHC4 was detected by RNA sequence analysis, and the positive results of Cell motility were detected. "results", "Bioengineering"reports". CRISPR knock out library (GeCKO v2 library) is the same as the SRRM4 Knock out (KO) UE7T-9 cell line CRISPR lenti v2, and the cell line CRISPR lenti v2 is the same as the cell line CRISPR lenti v2. The complete KO cell line was established and some of the KO cell lines confirmed that the cell line was isolated. MTS assay, Scratch assay, Soft agar assay, SRRM4KO cell culture, population comparison, colonization, mobility enhancement, and site-independent colonization. The decellularization and ossification is in progress, and the diagnosis is confirmed. RNA sequence analysis showed that hyperactivity was found in the factors of Extracellular matrix and Cytokine activity infection. The results of the SRRM4 review results show that you are ready to submit your articles and prepare for the final review. In the year of 2022, the cell lines were established, the acellular bone was developed, the birth rate was determined by low temperature, the rate of cloning was increased, and the birth rate was improved. The cause of the disease, the use of acellular ossification in 2022, the long-term preservation of physiological food under water, and the possibility of deterioration. In the future, we will use the acellular ossification of the baby to make it a baby. Subcutaneous transplantation is necessary to improve the quality of patients.