がん細胞の不均一性に対応した二重特異性CAR-T細胞の開発

CAR-T細胞療法の標的として、上皮成長因子受容体(EGFR)とインスリン様成長因子1受容体(IGF1R)を選択した。細胞株は、過去にEGFRとIGF1Rが共に発現していると報告されている肺腺がんを選択した。まず、フローサイトメトリー法により、細胞株におけるEGFRおよびIGF1Rの発現を評価した。EGFRはA549、H1975、HCC827において評価したが、いずれの細胞株もEGFRの発現が認められた。IGF1Rは、10種類の肺腺がん細胞株で評価した。そのうち、A549、H1568、H1355においてほぼ100％の発現が認められた。次にEGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞の作製をpiggyBacトランスポゾン法を用いて行った。両者ともday 10の時点で平均50％以上のCAR陽性率であった。また、CAR-T細胞の増殖も良好だった。T細胞のフェノタイプは、CD45RA+CD62L+細胞が大半を占めており幹細胞メモリー分画比率が高いことが判明し、質の高いCAR-T細胞であることが明らかになった。それぞれのCAR-T細胞が抗腫瘍効果を認めるか、E:T比4:1、2:1、1:1:、1:2、1:4の5条件でEGFRまたはIGF1R陽性肺腺がん細胞株と共培養を実施した。EGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞は、それぞれEGFR陽性、IGF1R陽性肺腺がん細胞株に対して抗腫瘍効果を示した。また、共培養開始24時間後に採取した培養上清をELISA法を用いてIFN-gammaとIL-2濃度を測定した。コントロールと比べてCAR-T群では有意に高いサイトカイン濃度を示した。

CAR-T細胞療法の標的として、上皮成長因子受容体(EGFR)とインスリン様成長因子1受容体(IGF1R)を選択した。細胞株は、過去にEGFRとIGF1Rが共に発現していると報告されている肺腺がんを選択した。まず、フローサイトメトリー法により、細胞株におけるEGFRおよびIGF1Rの発現を評価した。EGFRはA549、H1975、HCC827において評価したが、いずれの細胞株もEGFRの発現が認められた。IGF1Rは、10種類の肺腺がん細胞株で評価した。そのうち、A549、H1568、H1355においてほぼ100％の発現が認められた。次にEGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞の作製をpiggyBacトランスポゾン法を用いて行った。両者ともday 10の時点で平均50％以上のCAR陽性率であった。また、CAR-T細胞の増殖も良好だった。T細胞のフェノタイプは、CD45RA+CD62L+細胞が大半を占めており幹細胞メモリー分画比率が高いことが判明し、質の高いCAR-T細胞であることが明らかになった。それぞれのCAR-T細胞が抗腫瘍効果を認めるか、E:T比4:1、2:1、1:1:、1:2、1:4の5条件でEGFRまたはIGF1R陽性肺腺がん細胞株と共培養を実施した。EGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞は、それぞれEGFR陽性、IGF1R陽性肺腺がん細胞株に対して抗腫瘍効果を示した。また、共培養開始24時間後に採取した培養上清をELISA法を用いてIFN-gammaとIL-2濃度を測定した。コントロールと比べてCAR-T群では有意に高いサイトカイン濃度を示した。