がん細胞の不均一性に対応した二重特異性CAR-T細胞の開発

开发解决癌细胞异质性的双特异性 CAR-T 细胞

• 批准号: 21K15861
• 负责人: 平林 耕一
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15861/
• 关键词: EGFR; IGF1R; CAR-T細胞; piggyBacトランスポゾン法; 肺腺がん; がん免疫療法; 遺伝子改変T細胞療法

CAR-T細胞療法の標的として、上皮成長因子受容体(EGFR)とインスリン様成長因子1受容体(IGF1R)を選択した。細胞株は、過去にEGFRとIGF1Rが共に発現していると報告されている肺腺がんを選択した。まず、フローサイトメトリー法により、細胞株におけるEGFRおよびIGF1Rの発現を評価した。EGFRはA549、H1975、HCC827において評価したが、いずれの細胞株もEGFRの発現が認められた。IGF1Rは、10種類の肺腺がん細胞株で評価した。そのうち、A549、H1568、H1355においてほぼ100％の発現が認められた。次にEGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞の作製をpiggyBacトランスポゾン法を用いて行った。両者ともday 10の時点で平均50％以上のCAR陽性率であった。また、CAR-T細胞の増殖も良好だった。T細胞のフェノタイプは、CD45RA+CD62L+細胞が大半を占めており幹細胞メモリー分画比率が高いことが判明し、質の高いCAR-T細胞であることが明らかになった。それぞれのCAR-T細胞が抗腫瘍効果を認めるか、E:T比4:1、2:1、1:1:、1:2、1:4の5条件でEGFRまたはIGF1R陽性肺腺がん細胞株と共培養を実施した。EGFR CAR-T細胞およびIGF1R CAR-T細胞は、それぞれEGFR陽性、IGF1R陽性肺腺がん細胞株に対して抗腫瘍効果を示した。また、共培養開始24時間後に採取した培養上清をELISA法を用いてIFN-gammaとIL-2濃度を測定した。コントロールと比べてCAR-T群では有意に高いサイトカイン濃度を示した。

CAR-T cell therapy targets EGFR and IGF-1R. Cell line EGFR and IGF-1R are co-expressed in the lung. The development of EGFR and IGF-1R in cell lines was evaluated. EGFR was detected in A549, H1975 and HCC827 cell lines. IGF1R and 10 kinds of lung cancer cell lines were evaluated.そのうち、A549、H1568、H1355においてほぼ100%の発现が认められた。EGFR CAR-T cells and IGF-1R CAR-T cells are used in the piggy-based treatment. The average CAR positive rate is more than 50% at 10:00 a day. CAR-T cell proliferation is well developed. T cells are mainly composed of CD45RA + CD62L + cells and stem cells. 5 conditions of E:T ratio 4:1, 2:1, 1:1, 1:4 were used to co-culture EGFR-1R positive lung cells. EGFR CAR-T cells and IGF-1R CAR-T cells were found to be resistant to tumor in EGFR positive and IGF-1R positive lung cell lines. 24 hours after the start of the co-culture, culture supernatant was collected and IFN-gamma and IL-2 concentrations were measured by ELISA. Car-T group is intentionally high in concentration.