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脳弓下器官への新規自己抗体がNa代謝異常を起こす分子病態の解明と治療標的の探索

阐明穹窿下器官新型自身抗体导致钠代谢异常的分子病理学并寻找治疗靶点

基本信息

批准号：
21K15894
负责人：
宇都宮朱里
金额：
$ 2.33万
依托单位：
National Center for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

自己免疫性高Na血症ならびにROHHAD症候群の患者で認めた抗脳弓下器官抗体（SFO抗体)反応について、対応する抗原を同定するべく研究を行っている。国内、海外から収集した臨床診断された患者の血清サンプル約25例を解析対象とした。このうちSFO抗体陽性の患者血清サンプルのうち、既知報告されている抗Nax抗体陰性例は44％であった。その血清サンプルを用いてプロテインアレイ解析を施行した。結果80％の血清サンプルで共通した認められた抗原はZCAN1であった。疾患との関連性を証明するために、以下解析を行った。まず、マウス脳弓下器官組織を用いて患者血清と抗ZSCAN1抗体試薬を共培養したところ、同一の部位に共通に染まり発現していることが確認された。またZSCAN1抗原と１時間留置させた前後の患者血清でマウス脳弓下器官における免疫染色を行ったところ留置後の血清では染色が低下していた。これらのことからZSCAN1抗原を候補抗原と同定し、小麦胚芽細胞における無細胞培養システムを用いてZSCAN１抗原タンパクを発現させ、抽出し、マイクロプレートに固相化させた。ELISA試薬で反応させ停止させたのちに、蛍光吸光度計で450nmの強度を測定し、各血清サンプルについて、陽性陰性対照を基に抗体価を計算し40以上を陽性判定とした。本プレートを用いてELISA法により多数例の血清解析を開始した。疾患でない小児患者２０例ではいずれも陰性結果であったが、疾患患者ではこれまで行っていたマウス脳組織との免疫染色による解析とほぼ同等の結果を得ることができた。ELISA解析方法を使用し、臨床的に血漿交換、免疫グロブリン投与、ステロイドパルス治療をおこなった抗体反応陽性患者の前後の血清サンプルの採取ができ、それぞれの治療前後のサンプルで抗体反応を行った。いずれのサンプルでも治療後の抗体反応の低下を認めた。

The study was conducted to identify patients with autoimmune hypernatremia and ROHHAD syndrome and to determine the identity of anti-aortic antibodies (SFO antibodies). About 25 cases of serum samples collected from domestic and overseas clinical diagnosis were analyzed. 44% of the patients with SFO antibody positive were reported to be negative for anti-Nax antibody. The analysis of the serum concentration was carried out. Results 80% of the serum samples were identified as ZCAN1. The relationship between the disease and the disease is demonstrated by the following analysis In addition, it was confirmed that the serum of the patient and the anti-ZSCAN 1 antibody were co-cultured and the common staining of the same site was detected. Before and after the ZSCAN1 antigen was retained, the serum of the patient was stained with immunostaining for lower organs. ZSCAN 1 antigen is a candidate antigen for the development, extraction, and immobilization of wheat germ cells in cell-free culture. ELISA assay stops at 450 nm, absorbance at 450nm, serum concentration at 450nm, and antibody concentration at 450 nm. This article starts with the analysis of serum in most cases by ELISA. 20 cases of disease were negative, 20 cases of disease were negative, 20 ELISA analysis method is used in clinical plasma exchange, immune system administration, and serum samples taken from antibody-positive patients before and after treatment. After treatment, the antibody level decreased.