Mechanism analysis of a syndrome with congenital heart disease due to tyrosine kinase gene abnormality

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前年度にCRISPR-Cas9を用いてノックインマウスを作成したが、モデルマウスの生存率が極めて不良であることが問題となり、成獣を用いた解析は困難であると判断した。今年度は胎児サンプルを用いた解析を計画した。モデルマウス（ヘテロ）から精子を採取し、体外受精・胚移植でP19の胎仔サンプルを得た。胎仔の遺伝子型判定を行ったところ、ヘテロの割合が理論値（50%）よりかなり低かった。本モデルマウスが成獣まで生きられない原因を前年度は「先天性心疾患で生後早期に死亡するため」と想定したいたが、胎生致死である可能性が示唆された。胎仔サンプルから心臓を摘出し、総蛋白を抽出の後、プロテオーム解析を行った。モデルマウス群において、蛋白Aが顕著に発現亢進していることが確認された。蛋白Aは、それを発現する遺伝子Aの機能獲得型変異により先天性心疾患をはじめとした症候群の原因となることが知られている。Abl1の機能獲得型変異が遺伝子Aの発現亢進を介して様々は先天異常を呈している可能性が示唆された。Abl1はチロシンキナーゼなので、同様にリン酸化プロテオーム解析を行ったところ、心筋サルコメア構成要素の一種である蛋白Bのリン酸化亢進も確認された。蛋白Bは心筋症に関連する蛋白であるが先天性心疾患との関連は知られていないため、引き続き検討する。