肝細胞癌における分子標的治療の効果と薬剤耐性を早期予測するmicroRNAの同定

早期预测肝细胞癌分子靶向治疗疗效和耐药性的 microRNA 鉴定

• 批准号: 21K15928
• 负责人: 大浦 杏子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15928/
• 关键词: 肝細胞癌; microRNA; 分子標的治療薬; 薬剤耐性; Atezolizumab; Bevacizumab

Atezo/Beva療法を行ったuHCC患者66名を対象とし、6週後の造影CT結果をmodified RESISTで評価し、奏功群(CR+PR)と非奏功群(SD+PD)に分けて検討した。治療経過中の血清を用い、2555分子のmiRNAをmicroarrayおよびRT-PCRで測定し、VEGFはELISA法で定量した。In vitroでは、HCC株であるHuH-7と血管内皮細胞株であるHUVEC、共培養した細胞を用い、miR-485-3pをtransfectionし、scratch assayで細胞遊走能・増殖能を経時解析した。PIAS3/STAT3/VEGF signalの変化について、mRNA発現はRT-PCR、蛋白発現はWestern blotで解析した。背景は男性46名, 女性20名、平均年齢75.5±9.5歳、背景肝はHBV4名, HCV22名, NBNC40名、一次治療43名, 二次治療20名, 3次治療以降3名であった。Child-Pugh A/B=50/16名、臨床病期はcStage III/IVa/IVb=40/11/15名、Barcelona clinic liver cancer staging B/C=35/31名であった。奏功群44名と非奏功群22名を比較すると、奏功群群では治療開始前に10分子のmiRNAが有意に上昇し、特にmiR-485-3pは非奏功群より高値であり、翌日および3週後でさらに上昇した。治療療開始前の血清VEGF値 は有意差がなかったものの、翌日には両群ともに検出感度以下まで低下し、3週後/治療開始前比は奏功群が非奏功群が有意に低かった。多変量解析では、6週後の治療効果に関連する因子は治療開始前の血清miR-485-3p高値、治療開始3週後のVEGF上昇が有意に抽出された(p<0.05)。In vitroでは、miR-485-3pのtransfectionによってHuH-7およびHUVEC細胞遊走能・増殖能が抑制され、PIAS3発現が増強、STAT3/VEGF発現が抑制された。共培養した細胞ではPIAS3/STAT3/VEGF signalがより顕著に変化した。Atezo/Beva併用療法において、血清miR-485-3pはVEGFより鋭敏に変化するため、早期治療効果を予測するのに有用である。PIAS3/STAT3/VEGF signalが関連しており、今後バイオマーカーや創薬開発に臨床応用できる可能性がある。

Sixty-six patients with uHCC were examined by Atezo/Beva method. The results of CT after 6-year-old showed that the results of modified RESIST and non-performance group (SD+PD) were divided into two groups. During the treatment, the serum was used, 2555 molecular weight miRNA microarray was detected by RT-PCR assay, and VEGF ELISA method was used to quantify the quantity. In vitro and HCC strains were isolated from HuH-7 endothelial cells, HUVEC, co-cultured cell lines, miR-485-3p transfection cells and scratch assay cells were analyzed. PIAS3/STAT3/VEGF signal assay, mRNA assay, Western blot assay and protein assay respectively. Background: there were 46 males and 20 females with an average age of 75.5 ±9.5 years. There were HBV4, HCV22, NBNC40, 43 cases of primary treatment, 20 cases of secondary treatment and 3 cases of reduction after three times of treatment. Child-Pugh A/B=50/16 name, "bed sickness" cStage III/IVa/IVb=40/11/15 name, Barcelona clinic liver cancer staging B/C=35/31 name "bed sickness". There were 44 non-performers in the playing group, 22 in the non-playing group, 10 molecules in the miRNA group before the start of the treatment, the special miR-485-3p group in the non-performance group, and the next day in the morning. Before the beginning of the treatment, the serum VEGF level was intentionally lower than that of the non-performance group, and the sensitivity of the group was lower than that of the non-group on the next day. The serum miR-485-3p level was elevated before the beginning of treatment and intentionally extracted from the VEGF 3 weeks after the start of treatment (pairltbot 0.05). In vitro, miR-485-3p, transfection, HuH-7, HUVEC, PIAS3 and STAT3/VEGF showed inhibition, respectively. We have co-cultured the cells of the PIAS3/STAT3/VEGF signal plant to make sure that we have changed our culture. The method of Atezo/Beva was used, the serum miR-485-3p VEGF was sensitized, and the results of early treatment were used. In the future, it is very important for PIAS3/STAT3/VEGF signal to open the bed and the possibility of opening the bed is very important.

项目成果

Usefulness of serum angiogenic molecules as predictive biomarkers of the early disease progression in atezolizumab plus bevacizumab combination therapy for hepatocellular carcinoma

血清血管生成分子作为阿替珠单抗加贝伐单抗联合治疗肝细胞癌早期疾病进展的预测生物标志物的用途

• 发表时间: 2022
• 作者: 玉井 龍成;米田 頼晃;印牧 奨真;樫田 博史;工藤 正俊;半田 久志;米田頼晃 半田久志 工藤正俊;長谷川翔;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;大浦杏子;Kyoko Oura
• 通讯作者: Kyoko Oura

肝細胞癌に対するAteozolizumab/Bevacizumab併用療法における早期病勢進行(PD)の予測マーカーとしての血清血管新生分子測定の有用性

测量血清血管生成分子作为阿替佐利珠单抗/贝伐珠单抗联合治疗肝细胞癌早期疾病进展 (PD) 的预测标志物的有用性

• 发表时间: 2022
• 作者: 玉井 龍成;米田 頼晃;印牧 奨真;樫田 博史;工藤 正俊;半田 久志;米田頼晃 半田久志 工藤正俊;長谷川翔;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;大浦杏子;Kyoko Oura;大浦杏子
• 通讯作者: 大浦杏子

進行肝細胞癌におけるAteozolizumab/Bevacizumab併用療法中の早期病勢進行(PD)予測因子としての末梢血血管新生分子の解析

分析外周血血管生成分子作为晚期肝细胞癌 Ateozolizumab/贝伐单抗联合治疗期间早期疾病进展 (PD) 的预测因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 玉井 龍成;米田 頼晃;印牧 奨真;樫田 博史;工藤 正俊;半田 久志;米田頼晃 半田久志 工藤正俊;長谷川翔;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;Chihiro Takeuchi;大浦杏子
• 通讯作者: 大浦杏子