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肝線維化・再生における肝細胞間密着接合の変化とその意義の解明

阐明肝细胞之间紧密连接的变化及其在肝纤维化和再生中的意义

基本信息

批准号：
21K15943
负责人：
阿部寛幸
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15943/
关键词：
肝細胞間密着接合肝線維化肝再生タイトジャンクション

项目摘要

本研究は、肝線維化・再生における肝細胞の細胞間密着接合（タイトジャンクション）の発現変化とその意義、細胞老化、エクソソーム分泌に関する相互的な関連性を検証し、肝再生に向けた基礎的検討を行うことで線維化・再生における肝細胞の形質変化が明らかとなり、タイトジャンクションをターゲットとしたより選択的かつ効率的な再生療法へつながることを期待するものである。上記目的のため2021年度にマウス肝線維化モデルを用いて線維化に伴い変化がみられたタイトジャンクション遺伝子5つの中で最も大きな変化を認めた遺伝子に着目し、2022年度は肝細胞の培養細胞を用いて、同遺伝子発現の制御による影響を確認した。上記遺伝子の強発現のプラスミド及びsiRNAにより同遺伝子発現を抑制するプラスミドを用意した。これらを肝細胞の培養細胞であるAML12にトランスフェクションし、AML12におけるターゲットのタイトジャンクション遺伝子発現が強発現または発現抑制ができているかをウェスタンブロットで確認した。その後、これら遺伝子導入培養細胞を用いて細胞増殖における影響を評価した。細胞接着能についてはTEERを測定し、細胞増殖アッセイを実施、強発現系で増殖スピードの減弱がみられた。現在、マウス線維化モデル及び肝切除による肝再生モデルを用いて、上記ターゲット遺伝子制御のプラスミドをハイドロダイナミック遺伝子導入法で遺伝子導入することで、in vivoでの肝線維化、再生における影響を解析する準備を進めている。

In this study, close cell junction of hepatocytes was observed during liver maintenance and regeneration. The significance of the development of liver cells, the correlation between cell aging and the secretion of liver cells, the basic study of liver regeneration, the qualitative transformation of liver cells, the selection of liver regeneration therapy, and the expectation of liver regeneration therapy. In 2021, the target was to confirm the impact of the use of liver cells in culture and the control of the development of liver cells. Note the expression of strong genes and siRNAs to inhibit gene expression. This study confirmed that AML 12 cells in culture had strong gene expression and inhibition of gene expression. The effects of the introduction of the recombinant plasmid into cultured cells on cell proliferation were evaluated. The cell can then detect the presence of TEER, implement cell proliferation, and enhance the presence of cell proliferation. Now, the preparation for analyzing the influence of gene introduction on liver line maintenance and regeneration in vivo is in progress.