Rap1不活化制御による制御性T細胞の動態調節とその破綻による腸炎病態への影響

通过控制 Rap1 失活及其对小肠结肠炎病理学的破坏来调节调节性 T 细胞动力学

基本信息

批准号：
21K16011
负责人：
堀谷俊介
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16011/
关键词：
インテグリン Rap1 炎症性腸疾患制御性T細胞 Rap1シグナル

项目摘要

低分子量G蛋白質Rap1は細胞極性やインテグリン接着性調節する制御分子であり、生体内においてGTP交換因子(ＧEF)とGTPase活性化タンパク(GAP)のバランスにより調整されている。我々は、リンパ球におけるRapGapとして知られるSIPA1、RASA3を二重欠損させたT細胞を用いて生体内における機能解析を行った。RASA3;SIPA1二重欠損マウスのphenotype解析では、末梢血およびリンパ組織においてT細胞の低下を認め、特に末梢血での低下は顕著であった。RASA3;SIPA1二重欠損T細胞を用いたshort homing assay(AT1h)においてもリンパ組織へのホーミング異常が確認された。しかし、HEVへの接着、通過して実質に移動する過程への影響を検討したvery short homing assay（AT18分）ではホーミングに異常は確認されなかった。そこで、ケモカイン非存在下でもインテグリンが恒常的に活性化するRASA3;SIPA1二重欠損T細胞の性質から非リンパ組織に捕捉されている可能性を検討したところ、ICAM1が高発現している肺で主に捕捉されていることが分かった。そして肺への捕捉は抗LFA-1抗体による処理により阻害され、インテグリン活性化因子であるTalin1をさらに欠損させたT細胞においても肺での捕捉は阻害された。さらに、リンパ節におけるegressの効率を測定するとegressが顕著に低下していることが分かり、非リンパ組織での捕捉とこれらの二重異常により、末梢血での顕著な細胞数の低下につながることを明らかにした。さらにリンパ節におけるegressが低下している原因として、一度輸出リンパ管内に入ったT細胞が再度実質内に戻るというreverse migrationが起きていることを証明した。

低分子量G蛋白RAP1是调节细胞极性和整联蛋白粘附的调节分子，并通过GTP交换因子（GEF）和GTPase激活蛋白（GAP）之间的平衡来调节体内。我们使用在SIPA1和RASA3中双重缺陷的T细胞在体内进行了功能分析，称为淋巴细胞中的RAPGAP。 RASA3; SIPA1双缺陷小鼠的表型分析显示，外周血和淋巴组织中T细胞的降低，外周血的降低特别显着降低。还使用RASA3； SIPA1双缺陷T细胞在短归巢分析中（AT1H）证实了淋巴组织中的归巢异常。然而，在非常短的归巢测定法（AT18分钟）中未观察到归巢异常，该测定法检查了对HEV粘附的影响及其通过和迁移到骨骼中的影响。因此，我们研究了由于RASA3的性质； SIPA1双缺陷T细胞在非淋巴组织中捕获整联蛋白的可能性，即使没有趋化因子，它们也会被组成式地激活，并发现它们主要在ICAM1高度表达的地方主要在肺中捕获。然后，用抗LFA-1抗体治疗抑制肺捕获，并在整联蛋白激活剂TALIN1中进一步缺乏的T细胞中也抑制了肺捕获。此外，淋巴结中出口效率的测量表明，出口显着降低，表明非管lmph组织的捕获和这些双重异常导致外周血中细胞计数的显着降低。此外，我们已经证明了淋巴结中出口下降的原因是，曾经进入出口淋巴管的T细胞再次返回实质。