幹細胞由来肝類洞内皮細胞の作製と肝線維化治療への応用

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本研究は、幹細胞から肝類洞内皮細胞（liver sinusoidal endothelial cell; LSEC）を作製する技術の開発と肝線維化治療法の開発を目的としている。本年度は、（1）ヒト人工多能性幹細胞（iPS細胞）からLSECへの分化誘導法の改良と（2）LSECが障害を受けることによる肝線維化進展のメカニズムの解明を目的とした検討を実施した。(1)既存の分化誘導法の分化誘導効率の低さを解決する目的でヒトiPS細胞からLSEC前駆細胞への分化誘導法の改良を実施した。分化誘導に用いるサイトカイン・化合物の濃度や組み合わせ、作用期間などの条件を検討した結果、CD31/CD34共陽性細胞への分化誘導効率が向上した。さらに、これらの細胞をLSECへと分化誘導した結果、LSECマーカーであるCD32b陽性細胞が認められた。また、LSECの機能である血液凝固第VIII因子の分泌能もin vitroで確認された。以上から、より効率的なヒトiPS細胞からLSEC前駆細胞への分化誘導と機能的なLSECの作製が可能となった。(2)LSECが障害を受けることによる肝線維化進展のメカニズムの解明を目的として、LSECが障害を受けた際に発現が上昇する因子の中に、肝線維化病態に重要な肝星細胞の活性化に関与する因子があると仮説を立て、検証を実施した。肝星細胞を活性化する因子として既知のTGF-b1をポジティブコントロールとし、ヒト肝星細胞株であるLX2細胞を用いて評価を実施した。その結果、TGF-b1と同様に肝星細胞活性化マーカーであるACTA2（actin alpha 2, smooth muscle）の遺伝子発現を増加させる因子を同定した。この結果から、LSECの障害が肝線維化を促進するメカニズムの一つに肝星細胞を活性化させる作用を持つ因子の発現上昇が示唆された。