Therapeutic Application of CRISPR-Cas3 for dominant dystrophic Epidermolysis Bullosa

CRISPR-Cas3在显性营养不良性大疱性表皮松解症中的治疗应用

• 批准号: 21K16230
• 负责人: 森坂 広行
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka University (2022)Kochi University (2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16230/
• 关键词: 表皮水疱症; CRISPR; Cas3; 遺伝子編集; 遺伝子治療; ドミナントネガティブ; VII型コラーゲン

昨年度は顕性栄養障害型表皮水疱症(Dominant Dystrophic Epidermolysis Bullosa: DDEB)の細胞モデル作成の為に、CRISPR-Cas9タンパクを用いて、不死化ヒト角化細胞に遺伝子編集を行った。昨年度は2クローン得られており、それぞれDDEB、潜性遺伝型栄養障害型表皮水疱症（Recessive Dystrophic Epidemolysis Bullosa: RDEB)の特徴を示していた。すなわち、DDEBモデルでは蛍光免疫染色、ウエスタンブロットでVII型コラーゲンタンパク発現が見られ、RDEBモデルでは同タンパク発現が見られなかった。CRISPR-Cas3を用いた遺伝子治療においては様々な遺伝子変異のパターンに対応する必要があり、Cas9を用いてさらに複数のクローンを作出した。合計22クローンとなり、missense変異、nonsense変異、frame-shift変異など様々なパターンの組合せのクローンが得られた。

去年，为了创建一个细胞模型，用于使用CRISPR-CAS9蛋白质对永生化的人角质化细胞进行基因编辑的基因编辑。去年获得了两个克隆，分别显示了DDEB和隐性营养不良的表育作用Bullosa（RDEB）的特征。换句话说，DDEB模型在荧光免疫染色和蛋白质印迹中显示了VII型胶原蛋白的表达，而RDEB模型没有显示同一蛋白的表达。使用CRISPR-CAS3的基因治疗要求解决各种基因突变模式，并使用CAS9创建了多个克隆。总共获得了22个克隆，具有各种组合模式的克隆，例如错义突变，胡说八道突变和移位突变。

项目成果

優性型栄養障害型表皮水疱症へのCRISPR-Cas3の治療応用

CRISPR-Cas3在显性营养不良性大疱性表皮松解症中的治疗应用

• 发表时间: 2022
• 作者: Teruasa Murata;Tetsuya Honda;Alshimaa Mostafa;Kenji Kabashima;村田 光麻;村田 光麻;森坂 広行
• 通讯作者: 森坂 広行