Crosstalk between GATA3+ regulatory T cells and renal resident cells in crescentic glomerulonephritis

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腎炎回復期に出現するGATA3陽性組織制御性T細胞(Treg)の特徴の把握するために蛍光試薬SPiDER-βGal(株式会社同仁化学研究所)を用いて、1細胞レベルでの解析を目指した。しかし、フローサイトメトリー解析ではConventional T細胞でGATA3陽性のうち、β-galactosidase陽性細胞は約60%に、さらにGATA3陽性Tregのうちβ-galactosidase陽性細胞は約10-20%にとどまった。また組織解析でも自家蛍光との区別が困難で、明確にGATA3陽性Tregを区別できないと判断した。従って、GATA3陽性Tregのbulkもしくはsingle cell RNA-seq解析は施行できなかった。このため、まずin vitroでのGATA3陽性Tregの誘導を試みた。脾臓から単離したTregはCD3/CD28刺激なしでIL-2およびIL-33によりGATA3が強く発現することを明らかにした。Foxp3を発現しないConventional T細胞をIL-4およびIL-2のいわゆるTh2条件でTCR刺激をしたところ、TCR刺激を減らしていくと段階的にGATA3の発現は減少した一方で、TregにおいてはConventional T細胞の増殖に必要な程度のTCR刺激を加えたものは逆にGATA3の発現が抑制され、Foxp3を失ったexTregが増加した。しかし、TCR刺激を段階的に減らしていくとある程度の「強すぎないTCR刺激」ではexTregは増加せず、TCR刺激無しと比較してGATA3陽性Tregが増加することを明らかにした。腎固有細胞としてHatje FA, et al. J Am Soc Nephrol. 2021に従い、メサンギウム細胞、血管内皮細胞、足細胞のソーティングし、発現遺伝子についてRT-PCRで確認した。各々細胞培養が可能となった。