HIV-1タンパク質とRNAによるウイルス粒子形成メカニズムの解明

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Non-catalytic site integrase inhibitors（NCINIs）の変異体解析：NCINIsはINとHIV-RNAの結合を阻害する薬剤である。本研究では、NCINIs耐性アミノ酸変異を有するHIV-1 cloneの解析を行った。Integrase(IN)内のNCINIs耐性アミノ酸変異であるp26変異(A128T,H171Q,K173Q,N254K)は、NCINIsに関連する耐性変異であり、p26変異を有するHIV-1-IN・p26 cloneはHIV-1への感染性が低下していた。共存して認められたNucleocapsid(NC)内の変異であるD48Nは、明らかなNCINIsに対する耐性化を認めておらず、一方でHIV-1-NC・D48N cloneの細胞感染性を軽度上昇させていた。しかし、IN内のp26とNC内のD48Nの変異を両方有するクローンは、HIV-1の感染性および複製能が低下した。それぞれの変異体に関して逆転写効率を確認したところ、NC・D48N変異とIN・p26の変異をもつクローンはその逆転写効率が極端に低下していた。これは、NCとINが協調して逆転写に影響していることを示唆する所見である。蛍光複合体（SNAP-448-NC 、SNAP-546-IN ）の相分離現象の解析：HIV-1由来のタンパク質の相分離現象を確認するために蛍光物質（SNAP-Surface 488または546）をHIV-1タンパク質に結合させた複合体に関してE.coliを用いて精製・作成した。野生株に加えて、上述したNCINIs 変異株が相分離現象にどのような影響与えるか？変異体の作成も行った。NCは水溶性の乏しい不安定なタンパク質であり、非常に精製が困難であった。SNAP-INおよびSNAP-NCの野生株と変異株を蛍光顕微鏡を用いて、時間及び空間的な計測および解析を行ったが、沈殿が多く未だ解析が困難である。