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HIV-1タンパク質とRNAによるウイルス粒子形成メカニズムの解明

阐明HIV-1蛋白和RNA形成病毒颗粒的机制

基本信息

批准号：
21K16324
负责人：
中村朋文
金额：
$ 3万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16324/
关键词：
HIV-1 HIV-1　タンパク質 HIV-1 RNA NCINIs HIV-1形態 HIV-1 タンパク質 HIV-1 形態相分離現象

项目摘要

Non-catalytic site integrase inhibitors（NCINIs）の変異体解析：NCINIsはINとHIV-RNAの結合を阻害する薬剤である。本研究では、NCINIs耐性アミノ酸変異を有するHIV-1 cloneの解析を行った。Integrase(IN)内のNCINIs耐性アミノ酸変異であるp26変異(A128T,H171Q,K173Q,N254K)は、NCINIsに関連する耐性変異であり、p26変異を有するHIV-1-IN・p26 cloneはHIV-1への感染性が低下していた。共存して認められたNucleocapsid(NC)内の変異であるD48Nは、明らかなNCINIsに対する耐性化を認めておらず、一方でHIV-1-NC・D48N cloneの細胞感染性を軽度上昇させていた。しかし、IN内のp26とNC内のD48Nの変異を両方有するクローンは、HIV-1の感染性および複製能が低下した。それぞれの変異体に関して逆転写効率を確認したところ、NC・D48N変異とIN・p26の変異をもつクローンはその逆転写効率が極端に低下していた。これは、NCとINが協調して逆転写に影響していることを示唆する所見である。蛍光複合体（SNAP-448-NC 、SNAP-546-IN ）の相分離現象の解析：HIV-1由来のタンパク質の相分離現象を確認するために蛍光物質（SNAP-Surface 488または546）をHIV-1タンパク質に結合させた複合体に関してE.coliを用いて精製・作成した。野生株に加えて、上述したNCINIs 変異株が相分離現象にどのような影響与えるか？変異体の作成も行った。NCは水溶性の乏しい不安定なタンパク質であり、非常に精製が困難であった。SNAP-INおよびSNAP-NCの野生株と変異株を蛍光顕微鏡を用いて、時間及び空間的な計測および解析を行ったが、沈殿が多く未だ解析が困難である。

Analysis of Non-catalytic Site Integrase Inhibitors (NCINIs): NCINIs inhibit the binding of IN and HIV-RNA This study was conducted to analyze HIV-1 clone resistance to NCI. NCINIs in Integrase(IN) are resistant to p26 variants (A128T, H171Q, K173Q, N254K), and NCINIs are resistant to p26 variants. HIV-1-IN·p26 clone has low infectivity. The cellular infectivity of HIV-1-NC and D48N clone increased significantly in response to tolerance to NCINIs. The infection and replication ability of HIV-1 are lower than those of p26 and NC. The reverse writing efficiency of NC·D48N is extremely low. This is the first time I've ever seen someone who's been IN a relationship with someone else. Analysis of Phase Separation Phenomenon of Photoactive Complexes (SNAP-448-NC, SNAP-546-IN): Identification of Phase Separation Phenomenon of HIV-1 Origin and Substance; Purification and Preparation of Photoactive Substance (SNAP-488 and SNAP-546) Related to HIV-1 Combination and Complex with E.coli. Wild plants are added, and the above mentioned NCINIs are separated from each other. A different kind of work is done. NC is water soluble, unstable, and difficult to refine. SNAP-IN and SNAP-NC are difficult to measure and analyze in time and space using optical microscopes.