IFNβ-1aシグナルと低酸素応答系のクロストークによる肺血管内皮バリア機能制御

IFNβ-1a信号与缺氧反应系统串扰调节肺血管内皮屏障功能

• 批准号: 21K16542
• 负责人: 角 千里
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16542/
• 关键词: 急性呼吸窮迫症候群; interferon β-1a; 細胞間バリア機能; CD73; 低酸素誘導性因子; CD39; interferonβ-1a; IFNβ-1a; 細胞間バリア; HIF-1

急性呼吸窮迫症候群の治療薬候補として本邦でも臨床治験が行われているInterferon β-1a(INFβ-1a)の細胞間バリア機能への影響を解明することが本研究の目的である。この目的の達成のため血管内皮初代培養細胞，肺胞上皮・腸管上皮由来細胞株を用いて細胞外ドメインがEcto-5'-nucleotidaseを持つCD73分子の発現とそれに依存した細胞間バリア機能維持のメカニズムを細胞生物学・分子生物学・バイオインフォマティクスを統合した手法で解明することが研究の目的であった。ヒト臍帯静脈内皮細胞、ヒト肺微小血管内皮細胞から血管内皮バリアモデルの形成を試みアッセイ系の構築に成功した。このモデルバリアを用いてINF-α, LPSがバリア機能を阻害することつまり血管の透過性を促進すること、またその透過性の亢進がINFβ-1aにより軽減されるという実験結果を得た。CD73分子の発現をmRNA(qRT-PCR法), 蛋白質レベル(特異抗体を用いたWestern blot法, フローサイトメトリ法）で検出する実験系を確立してINFβ-1aによる誘導を確認した。さらにバリア機能の形成、維持に重要な役割を果たすタイトジャンクションを構成するZO-1, Claudin5, Occuludin, VE-cadherinなどのmRNA発現を調べたところこれらの誘導が観察された。2022年度はさらに次世代シーケンサを援用したRNA-Seqを行い網羅的な遺伝子発現変化を検索した。

In the treatment of acute respiratory distress syndrome, Interferon β-1a (INF β-1a) cytoskeleton can be used to understand the purpose of this study. Objective to establish the primary culture cells of vascular endothelium. The origin of lung cell epithelium and tubule epithelium of lung cell lines were analyzed by using extracellular Ecto-5'-nucleotidase (CD73). The results showed that the molecular mechanism of cell biology was able to maintain the molecular biology of lung cell epithelia and tube epithelia. The endothelial cells, the pulmonary microvascular endothelial cells, the vascular endothelial cells, the endothelial cells, the endothelial cells, After using INF- α, LPS was able to prevent vascular permeability, promote vascular permeability, and increase INF β-1a levels. The CD73 molecule was purified by mRNA (qRT-PCR method), and the protein was detected by the specific Western blot method, the specific antibody method, the specific Western blot method, the specific antibody method, the specific The system is capable of forming and maintaining important information. The results show that the ZO-1, Claudin5, Occuludin, and VE-cadherin are effective in monitoring the operation. In 2022, the next-generation mobile phone will use the subscriber of the RNA-Seq online network to realize the customization of the subscriber network.