新規分子標的治療薬による造精障害メカニズムの解明と精巣毒性バイオマーカーの確立

新型分子靶向治疗药物引起精子发生障碍的机制阐明及睾丸毒性生物标志物的建立

• 批准号: 21K16756
• 负责人: 野崎 哲史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16756/
• 关键词: 精巣毒性; エピゲノム; 精子形成

ヒストン脱メチル化酵素Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1)阻害剤であるNCL1を用いて、Invitro実験を行った。まず、マウスの精原細胞株であるGC-1を用いてChIP-qPCRアッセイを行った。次に、GC-1、マウスのライディッヒ細胞株であるTM3、マウスのセルトリ細胞株であるTM4を用いて、WST assayで細胞増殖能を、flow cytometryでアポトーシスを評価した。LSD1阻害剤はH3K4の脱メチル化を阻害し、がん増殖を抑制する。また、H3のメチル化は、Oct4によって抑制的に制御されることが知られている。そのため、ChIP-qPCRアッセイでは、H3K4me2抗体で免疫沈降を行い、Oct4のプロモーター領域のプライマーを作成し、qPCRを行うことで評価した。その結果、Oct4のメチル化状態が変化していた。WST assay では、GC1,TM3,TM4の各細胞に、0, 5,10,20,30 uMの濃度のNCL1を投与し、WST8で評価した。結果、NCL1の濃度依存的にGC-1の増殖抑制をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。Flow cytometryでは、GC1,TM3,TM4の各細胞に、NCL1 30uMを投与し、7AAD, PE AnexinⅤで評価した。結果、GC1では、アポトーシスの増加をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。

Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1) blocks the enzyme Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1) that blocks NCL1 and Invitro. The spermatogonia cell line GC-1 of Masato and Masato was used for ChIP-qPCR. Subaru, GC-1, Masakura cell strain TM3, Masakura cell strain TM4, WST Cell proliferation assay and flow cytometry evaluation. LSD1 blocks H3K4's detoxification and inhibits its proliferation.また, H3 のメチル化は, Oct4 によって suppressed にcontrol されることが知られている.そのため, ChIP-qPCR アッセイでは, H3K4me2 antibody でimmunoprecipitation を行い, Oct4のプロモター区のプライマーを成し, qPCRを行うことでvaluation価した.そのRESULT, Oct4のメチル化STATEが変化していた. WST assay was performed on each cell of GC1, TM3, and TM4, NCL1 was administered at concentrations of 0, 5, 10, 20, and 30 uM, and WST8 was evaluated. As a result, NCL1 inhibited the proliferation of GC-1, TM3, and TM4 in a concentration-dependent manner. Flow cytometry test, GC1, TM3, TM4 test each cell, NCL1 30uM test, 7AAD, PE AnexinⅤ test test. Result, GC1では, アポトーシスのincreasing plus をみとめたが, TM3, TM4 ではみられなかった.

项目成果

特発性非閉塞性無精子症（NOA）患者の採精率および精巣組織所見と年齢との関連

特发性非梗阻性无精症（NOA）患者精液采集率与睾丸组织检查结果和年龄的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩月正一郎;梅本幸裕;武田知樹;野崎哲史;水野健太郎
• 通讯作者: 水野健太郎

ヒストン脱メチル化酵素LSD1阻害剤による精巣毒性メカニズムの解明

组蛋白去甲基化酶LSD1抑制剂诱导睾丸毒性机制的阐明

• 发表时间: 2022
• 作者: 野崎 哲史;岩月 正一郎;内木 拓;鬼頭 拓未;武田 知樹;惠谷 俊紀;神沢 英幸;黒川 覚史;神谷 浩行;梅本 幸裕;安井 孝周
• 通讯作者: 安井 孝周

Identification of active spermatogenesis using a multiphoton microscope

• DOI: 10.1111/andr.13379
• 发表时间: 2023-01
• 期刊: Andrology
• 影响因子: 4.5
• 作者: Tomoki Takeda;Shoichiro Iwatsuki;S. Nozaki;A. Okada;K. Mizuno;Y. Umemoto;T. Yasui

非閉塞性無精子症患者における年齢と精子採取成績の関連

非梗阻性无精症患者年龄与取精结果的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩月 正一郎;梅本 幸裕;武田 知樹;野崎 哲史;吉原 紘行;伴野 千尋;松本 洋介;澤田 祐季;佐藤 剛;杉浦 真弓;安井 孝周
• 通讯作者: 安井 孝周