Investigation of the activation mechanism of TGFb pathway involved in fibrosis in endometriosis

TGFb通路参与子宫内膜异位症纤维化的激活机制探讨

• 批准号: 21K16816
• 负责人: 三原 由実子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16816/
• 关键词: 子宮内膜症; HOXC8; 線維化; TGFβ

in vivoにおけるHOXC8の機能を明らかにするため、子宮内膜症異種移植モデルを作成した。移植実験に用いる細胞として、不死化子宮内膜間質細胞(imESC)を用いた。レトロウイルス発現ベクターにHOXC8とAcGFPを挿入し、挿入したレトロウイルスベクターをimESCに導入したHOXC8-imESCと、コントロールとして、AcGFPのみ挿入しimESCに導入したGFP-imESCを樹立した。HOXC8-imESC 、GFP-imESC と共に移植する上皮細胞は、子宮内膜上皮細胞株であるEM－１を用いた。樹立したHOXC8-imESCとGFP-imESCのmRNA発現量、蛋白発現量はreal-time RT-PCR、Western　Blottingにて確認した。HOXC8-imESC + EM-1、GFP-imESC + EM-1とコラーゲンゲル溶液をそれぞれ懸濁し、細胞凝集塊を作成し、卵巣を除去した重度免疫不全マウス（NOD/ShiJic-scidJclマウス）の腎被膜下に、細胞凝集塊を移植した。HE染色の結果、HOXC8-imESC移植腎およびGFP-imESC移植腎とも腎被膜下に移植細胞由来と考えられる組織が認められ、また同部位は免疫染色においてVimentin抗体陽性であることから移植細胞由来の組織であることが確認された。HOXC8-imESC移植腎のHE染色においては腎被膜下に形態的に膠原線維と考えられる組織が増加しており、さらに同部位はトリクローム染色により青く染色され、HOXC8の過剰発現によってコラーゲン産生が増加していることがin vivoでも示唆された。またHOXC8-imESCでは移植組織が腎実質側に入り込んでいることも確認できた。このことから、HOXC8の過剰発現はin vivoにおいても遊走能、癒着形成、線維化能を亢進すると考えられた。

In vivo testing HOXC8 machine can be used to verify the diagnosis of endometriosis and endometriosis in children. The grafts were used for transplantation and immortalized embryos were used for imESC and immortalized embryos respectively. Now that you know that you are going to HOXC8 your AcGFP, you will need to enter your HOXC8-imESC, your HOXC8-imESC, your AcGFP, your imESC, and your GFP-imESC. HOXC8-imESC and GFP-imESC were co-transplanted into epithelial cells and endometrial epithelial cell lines were used to treat EM-1. HOXC8-imESC, GFP-imESC, mRNA, protein, real-time RT-PCR, Western Blotting, confirm. HOXC8-imESC + EM-1, GFP-imESC + EM-1 immunotherapy solution, cell agglutination, cell agglutination, egg removal, severe immune insufficiency (NOD/ShiJic-scidJcl), subcapsular infection, cell agglutination, transplantation. The results of HE staining, HOXC8-imESC transplantation, GFP-imESC transplantation, subcapsular transplantation, the origin of subcapsular transplantation, immunostaining of Vimentin antibodies in the same site, the origin of the transplantation cells, the origin of the transplantation cells. HOXC8-imESC transplant, HE staining, subcapsular morphology, subcapsular morphology, tissue tissue, tissue tissue, tissue tissue, The HOXC8-imESC migration organization is required to confirm that it is important to enter the migration organization. The results of HOXC8 screening and in vivo screening show that there is a significant increase in the ability to walk, form, and maintain energy levels.