Investigation of the activation mechanism of TGFb pathway involved in fibrosis in endometriosis

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in vivoにおけるHOXC8の機能を明らかにするため、子宮内膜症異種移植モデルを作成した。移植実験に用いる細胞として、不死化子宮内膜間質細胞(imESC)を用いた。レトロウイルス発現ベクターにHOXC8とAcGFPを挿入し、挿入したレトロウイルスベクターをimESCに導入したHOXC8-imESCと、コントロールとして、AcGFPのみ挿入しimESCに導入したGFP-imESCを樹立した。HOXC8-imESC 、GFP-imESC と共に移植する上皮細胞は、子宮内膜上皮細胞株であるEM－１を用いた。樹立したHOXC8-imESCとGFP-imESCのmRNA発現量、蛋白発現量はreal-time RT-PCR、Western　Blottingにて確認した。HOXC8-imESC + EM-1、GFP-imESC + EM-1とコラーゲンゲル溶液をそれぞれ懸濁し、細胞凝集塊を作成し、卵巣を除去した重度免疫不全マウス（NOD/ShiJic-scidJclマウス）の腎被膜下に、細胞凝集塊を移植した。HE染色の結果、HOXC8-imESC移植腎およびGFP-imESC移植腎とも腎被膜下に移植細胞由来と考えられる組織が認められ、また同部位は免疫染色においてVimentin抗体陽性であることから移植細胞由来の組織であることが確認された。HOXC8-imESC移植腎のHE染色においては腎被膜下に形態的に膠原線維と考えられる組織が増加しており、さらに同部位はトリクローム染色により青く染色され、HOXC8の過剰発現によってコラーゲン産生が増加していることがin vivoでも示唆された。またHOXC8-imESCでは移植組織が腎実質側に入り込んでいることも確認できた。このことから、HOXC8の過剰発現はin vivoにおいても遊走能、癒着形成、線維化能を亢進すると考えられた。