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体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞の局所炎症環境下における免疫抑制能の解析

局部炎症环境下体外培养的骨髓源性免疫抑制细胞的免疫抑制能力分析

基本信息

批准号：
21K16884
负责人：
藤本啓一
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、体外培養した骨髄由来免疫抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cell, BM-MDSC)の免疫抑制効果を高リスク角膜移植マウスモデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤研究を実施する。C57/BL6Jマウスの骨髄細胞をインターロイキン(IL)-6、顆粒球単球コロニー刺激因子(GM-CSF)と共培養し、BM-MDSC(Gr1陽性CD11b陽性細胞)を誘導した。混合リンパ球反応(MLR)にBM-MDSCを付加し、T細胞増殖能を評価した。また、フローサイトメトリーで制御性T細胞の割合を測定した。MLR後のサイトカインの発現量(ELISA法)、誘導性一酸化窒素合成酵素(iNOS)の発現(リアルタイムPCR法)ならびに一酸化窒素(NO) の産生を測定した。令和4年度は、血管新生を誘導した高リスクマウス角膜移植モデルを作成し、結膜下注射によるBM-MDSCの移入ならびに角膜移植片の生存率、血管・リンパ管新生を評価した。IL-6とGM-CSFの共培養によりiNOSの発現が増加したBM-MDSCが誘導された。BM-MDSCのMLRへの付加により炎症性サイトカインの減少、抑制性サイトカインの増加、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導を認めた。また、結膜下注射によるBM-MDSCの角膜移植片へ移行ならびに生存率の延長、血管新生ならびにリンパ管新生の抑制を認めた。BM-MDSCはiNOS経路を介して、T細胞増殖の抑制、制御性T細胞の誘導、血管・リンパ管新生の抑制によりマウス角膜移植片の拒絶反応を抑制した。本研究では、体外培養したBM-MDSCの免疫抑制効果を高リスクマウス角膜移植モデルで検証し、ヒト角膜移植における新規免疫寛容療法開発の基盤を構築した。

The purpose of this study was to investigate the immunosuppressive effects of Myeloid-derived suppressor cells (BM-MDSC) cultured in vitro on corneal transplantation and to develop a new immunosuppressive therapy for corneal transplantation. C57/BL6J cells were induced by IL-6, granulocyte macrophage stimulating factor (GM-CSF) and co-culture, BM-MDSC(Gr1-positive CD11b-positive cells). Mixed lymphocyte reaction (MLR) and T cell proliferation To determine the binding of regulatory T cells After MLR, the production of enzyme (ELISA), the production of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and the production of nitric oxide synthase (NO) were measured. In order to evaluate the survival rate of corneal grafts and angiogenesis induced by BM-MDSC in subconjunctival injection and corneal transplantation in 4 years IL-6 and GM-CSF co-culture increased iNOS expression and BM-MDSC induction. The increase of MLR in BM-MDSC includes the reduction of inflammatory cells, the increase of inhibitory cells, the inhibition of T cell proliferation, and the induction of inhibitory T cells. Prolonged survival, angiogenesis, and inhibition of angiogenesis in corneal grafts transplanted with BM-MDSC by subconjunctival injection BM-MDSC regulates iNOS pathway, inhibits T cell proliferation, inhibits T cell induction, inhibits angiogenesis, and inhibits rejection of corneal grafts. In this study, the immunosuppressive effect of BM-MDSC cultured in vitro was studied to construct a novel immunotherapy substrate for corneal transplantation.