口腔粘膜におけるSARS-CoV-2 結合受容体の免疫応答機構の解明

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新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) の原因ウイルスである SARS-CoV-2 は細胞表面に存在するアンギオテンシン変換酵素 ACE2 を受容体として結合することが報告されている。ACE2 は口腔組織に発現していることが近年報告されているが，ACE2 の宿主免疫応答機構は不明である。本研究は口腔粘膜におけるウイルス感染に対するACE2 の新規宿主免疫応答機構を解明することを目的とする。2021年度，2022年度は口腔粘膜細胞におけるACE2の発現を検討した。不死化口腔粘膜上皮細胞RT7, 不死化歯肉線維芽細胞GT1 ，正常口腔粘膜上皮細胞，正常歯肉線維芽細胞の全RNAを抽出，cDNAを作成し，RT-PCR法によってACE2mRNAの発現を検討した。その結果，RT7,GT1 , 正常口腔粘膜細胞において定常的なACE2 mRNAの発現が認められた。またRT7,GT1の蛋白を抽出し，ACE2抗体を用いたWestern blotting 法によってACE2蛋白の発現を検討した。RT7,GT1において120kDの位置にACE2 蛋白のバンドが認められた。またRT7,GT1をチャンバースライドに培養し，ACE2抗体を用いた蛍光免疫染色を行った結果，RT7,GT1にACE2の局在が認められた。次にRT7, GT1 における核酸の細胞内導入によるACE2の発現誘導をReal-time PCR法にて検討した。RT7, GT1において一本鎖DNA, RNA添加，二本鎖DNA, RNA添加において両細胞におけるACE2発現誘導に変化は認められなかった。一方，一本鎖DNA, RNAの細胞内導入によっても両細胞におけるACE2 の発現に変化は認められなかったが，二本鎖DNA, RNAの細胞内導入によって著しいACE2の発現誘導が示された。