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口腔粘膜におけるSARS-CoV-2 結合受容体の免疫応答機構の解明

阐明口腔粘膜中SARS-CoV-2结合受体的免疫反应机制

基本信息

批准号：
21K17116
负责人：
鳴瀬貴子
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) の原因ウイルスである SARS-CoV-2 は細胞表面に存在するアンギオテンシン変換酵素 ACE2 を受容体として結合することが報告されている。ACE2 は口腔組織に発現していることが近年報告されているが，ACE2 の宿主免疫応答機構は不明である。本研究は口腔粘膜におけるウイルス感染に対するACE2 の新規宿主免疫応答機構を解明することを目的とする。2021年度，2022年度は口腔粘膜細胞におけるACE2の発現を検討した。不死化口腔粘膜上皮細胞RT7, 不死化歯肉線維芽細胞GT1 ，正常口腔粘膜上皮細胞，正常歯肉線維芽細胞の全RNAを抽出，cDNAを作成し，RT-PCR法によってACE2mRNAの発現を検討した。その結果，RT7,GT1 , 正常口腔粘膜細胞において定常的なACE2 mRNAの発現が認められた。またRT7,GT1の蛋白を抽出し，ACE2抗体を用いたWestern blotting 法によってACE2蛋白の発現を検討した。RT7,GT1において120kDの位置にACE2 蛋白のバンドが認められた。またRT7,GT1をチャンバースライドに培養し，ACE2抗体を用いた蛍光免疫染色を行った結果，RT7,GT1にACE2の局在が認められた。次にRT7, GT1 における核酸の細胞内導入によるACE2の発現誘導をReal-time PCR法にて検討した。RT7, GT1において一本鎖DNA, RNA添加，二本鎖DNA, RNA添加において両細胞におけるACE2発現誘導に変化は認められなかった。一方，一本鎖DNA, RNAの細胞内導入によっても両細胞におけるACE2 の発現に変化は認められなかったが，二本鎖DNA, RNAの細胞内導入によって著しいACE2の発現誘導が示された。

The cause of the new infectious disease (COVID-19) SARS-CoV-2 exists on the cell surface and the enzyme ACE2 is present on the cell surface.をReceiver として combines することが report されている. The presence of ACE2 in oral tissue has been reported in recent years, and the host immune response mechanism of ACE2 has been unknown. The purpose of this study was to unravel the new host immune response mechanism of ACE2 infection in the oral mucosa. In 2021 and 2022, the oral mucosal cells will be tested for ACE2. Immortalized oral mucosal epithelial cells RT7, immortalized sarcoma cells GT1, normal oral mucosal epithelial cells, and normal sarcoma vesicular cells were extracted with whole RNA, cDNA was prepared, and RT-PCR method was used to detect ACE2mRNA. As a result, RT7, GT1, and normal oral mucosal cells showed constant levels of ACE2 mRNA. The proteins of RT7 and GT1 were extracted, and the ACE2 antibody was extracted using the Western blotting method. The ACE2 protein was detected using the Western blotting method. RT7, GT1 120kD ACE2 protein 120kD ACE2 protein. RT7 and GT1 were cultured in the same tube, and the ACE2 antibody was stained with light immunostaining. RT7 and GT1 nucleic acids were introduced into cells and ACE2 was induced using Real-time PCR method. RT7, GT1, one lock DNA, RNA is added, two locks DNA, RNA is added, the cells are now induced, and ACE2 is now induced and changed. On the one hand, one locks DNA and RNA is introduced into the cell, and the other two locks DNA, The introduction of RNA into the cells is done and the induction of ACE2 is done.