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口腔粘膜におけるSARS-CoV-2 結合受容体の免疫応答機構の解明

阐明口腔粘膜中SARS-CoV-2结合受体的免疫反应机制

基本信息

批准号：
21K17116
负责人：
鳴瀬貴子
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) の原因ウイルスである SARS-CoV-2 は細胞表面に存在するアンギオテンシン変換酵素 ACE2 を受容体として結合することが報告されている。ACE2 は口腔組織に発現していることが近年報告されているが，ACE2 の宿主免疫応答機構は不明である。本研究は口腔粘膜におけるウイルス感染に対するACE2 の新規宿主免疫応答機構を解明することを目的とする。2021年度，2022年度は口腔粘膜細胞におけるACE2の発現を検討した。不死化口腔粘膜上皮細胞RT7, 不死化歯肉線維芽細胞GT1 ，正常口腔粘膜上皮細胞，正常歯肉線維芽細胞の全RNAを抽出，cDNAを作成し，RT-PCR法によってACE2mRNAの発現を検討した。その結果，RT7,GT1 , 正常口腔粘膜細胞において定常的なACE2 mRNAの発現が認められた。またRT7,GT1の蛋白を抽出し，ACE2抗体を用いたWestern blotting 法によってACE2蛋白の発現を検討した。RT7,GT1において120kDの位置にACE2 蛋白のバンドが認められた。またRT7,GT1をチャンバースライドに培養し，ACE2抗体を用いた蛍光免疫染色を行った結果，RT7,GT1にACE2の局在が認められた。次にRT7, GT1 における核酸の細胞内導入によるACE2の発現誘導をReal-time PCR法にて検討した。RT7, GT1において一本鎖DNA, RNA添加，二本鎖DNA, RNA添加において両細胞におけるACE2発現誘導に変化は認められなかった。一方，一本鎖DNA, RNAの細胞内導入によっても両細胞におけるACE2 の発現に変化は認められなかったが，二本鎖DNA, RNAの細胞内導入によって著しいACE2の発現誘導が示された。

The cause of a novel SARS infection (COVID-19) is reported to be the presence of SARS-CoV-2 on the cell surface and the binding of ACE2 to the receptor. ACE2 has been reported in recent years, and its host immune response mechanism is unknown. This study aims to clarify the role of ACE2 in host immune response to oral mucosal infections. In 2021, the development of ACE2 in oral mucosa cells was discussed in 2022. Complete RNA was extracted from immortal oral epithelial cells RT7, immortal dental germ cells GT1, normal oral epithelial cells and normal dental germ cells, cDNA was prepared, and the expression of ACE2 mRNA was investigated by RT-PCR. RT7, GT1, and ACE2 mRNA expression in normal oral mucosa cells were detected. The protein of RT7,GT1 was extracted and the protein of ACE 2 was detected by Western blotting. RT7,GT1, ACE2 protein at the 120kD position. RT7, GT1 and ACE2 antibody were detected by immunostaining. Next, RT7, GT1 and ACE2 were introduced into cells and detected by Real-time PCR. RT7, GT1, 1-lock DNA, RNA addition, 2-lock DNA, RNA addition, ACE2, induction, transformation and recognition The intracellular introduction of DNA, RNA and ACE2 into the cells of a single, single