权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

高度マルチプレックスSELEX法による機能性分子の限定的創製戦略の構築

使用先进的多重SELEX方法构建功能分子的有限创造策略

基本信息

批准号：
22K14789
负责人：
天野亮
金额：
$ 3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

創薬シーズの探索力の強化・高度化は、あらゆる疾患や生命現象の制御（創薬）と理解の深化（学術）に必須である。本課題では、RNAアプタマー特有の柔軟な創製法「SELEX法」を基盤とし、これまで困難であった「結合部位の限定化」と創薬（前臨床）に必須である「マウス/ヒト交差性（種差の壁）を克服する技術を、複数の標的分子を組み合わせた「マルチプレックスSELEX法」の構築によって実現することを目指す。本年度はまず、組換えマウス・ヒトトランスフェリン受容体（TfR）とインスリン受容体（IR）単体および内在性リガンドとの複合体を3種類の選抜材料を組合せて用いることで、結合部位を「マウス/ヒト共通部位かつ非リガンド結合部位」に限定化したSELEX実験および表面プラズモン共鳴（SPR）法による候補配列の機能評価を行った。約9回程度の選抜と増幅操作を繰り返した後、濃縮ライブラリーをハイスループットシーケンサーで解析、得られた膨大な配列情報から、アプタマー配列解析用プログラムFASTAptamer（doi: 10.1038/mtna.2015.4.）を用いて、候補配列を抽出した。次に、SPR解析によって、候補配列の結合標的の同定、結合親和性（解離定数 Kd）の算出およびマウス/ヒト交差性、内在性リガンドとの競合阻害性の評価を実施した。その結果、内在性リガンドとの非競合性を示す抗TfRアプタマー（Kd : 48 pM）とマウス/ヒト交差性を示す抗IRアプタマー（Kd : 0.044 pM）を単一のSELEX実験にて一挙に取得できた。このように本年度では、目標達成のためのマルチプレックスSELEX法およびSPR法による機能評価系の構築を完了し、さらに、当該技術の活用によって、マウス/ヒト交差性と内在性リガンドとの非競合性を示すアプタマー分子それぞれの取得に成功した。

The exploration power of creation, enhancement, disease, control of life phenomena (creation) and deepening of understanding (scholarship) are essential. This project is aimed at solving the problem of RNA cross-linking by using SELEX method. This year, the functional evaluation of three kinds of selected materials for TfR, IR, IR About 9 levels of selection and amplitude increase operation, after returning to the back, concentrate, select, select, The candidate is selected. The determination of binding target identity and binding affinity (dissociation constant Kd) of secondary, SPR analysis, candidate alignment, and evaluation of competitive resistance were carried out. The results, intrinsic properties, and non-competitive properties are shown in the anti-TfR profile (Kd : 48 pM), anti-IR profile (Kd : 0.044 pM), and a SELEX profile is obtained. This year, the goal was achieved. The construction of the functional evaluation system was completed by the selection method and SPR method. When the technology was used, the inherent characteristics of the technology and the non-competitive characteristics of the technology were successfully achieved.