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アーキア特有のセレンタンパク質合成機構

古细菌独特的硒蛋白合成机制

基本信息

批准号：
22K14815
负责人：
青野陸
金额：
$ 3万
依托单位：
Ritsumeikan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14815/
关键词：
セレンタンパク質アーキア翻訳伸長因子 SECIS

项目摘要

アーキアは細菌と同様に原核生物であるが、21番目のアミノ酸であるセレノシステイン (Sec) を含有するセレンタンパク質の合成機構は真核生物に近いと考えられている。Secは本来終止コドンであるUGAに挿入されることが知られており、その挿入にはmRNA上に存在し、ステムループ二次構造を形成するSec挿入配列 (SECIS) を必要とする。真核生物にはSECIS結合タンパク質eSBP2が存在し、Sec-tRNAを運搬するSelBはSECISに結合したeSBP2を認識することでポリペプチド中にSecを挿入する。しかし、真核生物のセレンタンパク質合成において鍵となるeSBP2はアーキアには存在せず、アーキアにおける詳細な合成機構は不明である。本研究ではアーキアにおけるセレンタンパク質合成機構の解明を目指して研究を行っている。本研究の対象として、メタン生成アーキアMethanothermococcus okinawensisを選定した。eSBP2と同様に、アーキアにもSECISに結合してSelBを呼び込むaSBPが存在する可能性を考え、SelBと相互作用するタンパク質の探索を行った。まず大腸菌を用いてHis-tag付加組換え型SelBを調製した。調製した組換え型タンパク質と、M. okinawensisの細胞抽出液を用いてNiカラムによるプルダウンアッセイを行ったところ、SelBと同様の溶出パターンを示すaSBP候補タンパク質がいくつか観察された。また調製した組換え型タンパク質をもとに抗体を作製して免疫沈降を検討したところ、細胞抽出液中のSelBを補足することに成功した。

The bacteria and the prokaryotes are the same. Secs are necessary for the formation of secondary structures in the presence of UGA and its mRNA. In eukaryotes, SECIS binds to eSBP2, and sec-tRNA transport to eSBP2. Eukaryotic organisms have a complex synthesis mechanism. This study is aimed at clarifying the mechanism of mass synthesis. This study is aimed at the development of Methanothermococcus okinawensis. eSBP2 and identity, loss, SECIS, SelB and interaction, possibility of existence, quality, etc. Coliform bacteria can be used in His-tag conversion and self-regulation. Modulation, composition, type, quality, M. Okinawensis cell extract is used to extract samples from the cells. The sample is extracted from the cell extract by HPLC. SelB and the same sample are extracted from the cell extract. In addition, the immune system was successfully prepared by modulating the type of antibody in the cell extract and by supplementing the antibody in the cell extract