表面電荷と膜構造に基づく血中からの細胞外小胞の新規単離方法の開発

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究は、リポタンパク質を効果的に排除した血漿からの細胞外小胞の新たな単離方法を開発することを目的としている。令和4年度は申請時の計画調書に記載の通り、ポリアニオンと二価の陽イオンから成る溶液をヒト血漿と混和して、細胞外小胞のみを特異的に単離できるような濃度条件を検討した。ELISAによる細胞外小胞特異的マーカータンパク質の発現量測定及びネガティブ染色による形態観察の結果、特定のポリアニオンと二価の陽イオンを至適濃度で混合して血漿に混和すると、リポタンパク質であるHDL/LDL/VLDLを特異的に多く含む分画と、細胞外小胞を特異的に多く含む分画とに分取できることが分かった。なお、細胞外小胞の単離には不適であるものの、HDLの分画とLDL/VLDLおよび細胞外小胞が混在する分画とに分離するポリアニオン・二価の陽イオンの組み合わせも検討の過程で見出された。これまで、純度の高い細胞外小胞を血漿から単離するためには2種類以上の方法を組み合わせるのが一般的であり、非常に時間のかかる煩雑な手技が必要であった。一方で、血漿に溶液を混和して遠心分離を行うだけと非常に簡便である上に特別な装置方法も必要としない本法は、血漿からの細胞外小胞の新規単離方法として有効と考えられる。以上の成果は2023年5月に開催されるInternational Society for Extracellular Vesicles Annual Meeting 2023において発表する予定となっている。