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表面電荷と膜構造に基づく血中からの細胞外小胞の新規単離方法の開発

开发基于表面电荷和膜结构的从血液中分离细胞外囊泡的新方法

基本信息

批准号：
22K15016
负责人：
大谷紘資
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15016/
关键词：
細胞外小胞血漿リポタンパク質ポリアニオン陽イオン

项目摘要

本研究は、リポタンパク質を効果的に排除した血漿からの細胞外小胞の新たな単離方法を開発することを目的としている。令和4年度は申請時の計画調書に記載の通り、ポリアニオンと二価の陽イオンから成る溶液をヒト血漿と混和して、細胞外小胞のみを特異的に単離できるような濃度条件を検討した。ELISAによる細胞外小胞特異的マーカータンパク質の発現量測定及びネガティブ染色による形態観察の結果、特定のポリアニオンと二価の陽イオンを至適濃度で混合して血漿に混和すると、リポタンパク質であるHDL/LDL/VLDLを特異的に多く含む分画と、細胞外小胞を特異的に多く含む分画とに分取できることが分かった。なお、細胞外小胞の単離には不適であるものの、HDLの分画とLDL/VLDLおよび細胞外小胞が混在する分画とに分離するポリアニオン・二価の陽イオンの組み合わせも検討の過程で見出された。これまで、純度の高い細胞外小胞を血漿から単離するためには2種類以上の方法を組み合わせるのが一般的であり、非常に時間のかかる煩雑な手技が必要であった。一方で、血漿に溶液を混和して遠心分離を行うだけと非常に簡便である上に特別な装置方法も必要としない本法は、血漿からの細胞外小胞の新規単離方法として有効と考えられる。以上の成果は2023年5月に開催されるInternational Society for Extracellular Vesicles Annual Meeting 2023において発表する予定となっている。

The aim of this study is to develop a new method for the isolation of extracellular vesicles from plasma. In 2004, the project adjustment book at the time of application described the communication, concentration and concentration conditions of plasma and extracellular vesicles. ELISA for extracellular vesicle specific protein production assay and morphological observation results of protein staining, specific protein and protein concentration, plasma mixing, protein concentration, HDL/LDL/VLDL specific protein content, extracellular vesicle specific protein content and protein concentration. The separation of LDL and VLDL from extracellular cells is discussed in detail. The purity of extracellular cells is high. More than 2 kinds of methods are used to combine them. The general and special time are necessary. On the one hand, mixing of plasma and solution and telecentric separation are very simple and convenient, but special equipment and methods are not necessary. This method is effective and effective in the new method of separating extracellular cells from plasma. These results were presented at the International Society for Extracellular Vesicles Annual Meeting 2023 in May 2023.