心血管疾患治療への応用を目指した新たなＴｒｋＢアイソフォーム機能の解明

阐明新的 TrkB 亚型功能在心血管疾病治疗中的应用

• 批准号: 17J02328
• 负责人: 大谷 紘資
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J02328/
• 关键词: 高血圧症; 中枢; TrkB; マイクロRNA; 心血管疾患; 脳由来神経栄養因子（BDNF）; TrkB (NTRK2); TrkB（NTRK2）

前年度のWestern blottingによる解析で、高血圧症モデルラットでは正常ラットと比較してtyrosine receptor kinase B(TrkB)のアイソフォームであるTrkB T1タンパク質の発現が脳内の視床下部前部で亢進していることが明らかになった。そこで本年度は組織学的な手法により、視床下部前部のどの細胞でTrkB T1タンパク質の発現が亢進しているのかを詳細に解析するための基礎的な検討を行った。これまで用いていた市販のTrkB T1抗体は、免疫組織化学染色には適さなかったため、新たな精製抗体を作製した。しかしこの精製抗体を用いても、脳内におけるTrkB T1の特異的な発現は検出できなかった。また、Western blottingにより正常ラットの脳組織における発現も検討したが、作製した精製抗体を用いてTrkB T1の発現を検出することは出来なかった。さらに、データベースを用いてTrkB T1遺伝子を抑制性に制御することが予想されるマイクロRNAを見出した。このマイクロRNAをHEK293T細胞に過剰発現させ、細胞の培養上清から細胞外小胞(マイクロRNAを大量に含むと考えられる)を単離して高血圧症モデルラットの視床下部前部に投与した。その結果、過剰発現を行っていないHEK293T細胞の培養上清由来の細胞外小胞を投与した群と比較して、収縮期血圧が低下する傾向を示した。以上より、高血圧症モデルラットでは視床下部前部で高発現するTrkB T1が全身血圧の上昇を制御することと、これにマイクロRNAが関与していることが示唆された。そのため、脳内のTrkBアイソフォーム発現の変化は、今後の研究により高血圧症における新たな予防・治療の標的となることが期待される。

Before the annual の Western blotting に よ る parsing で, high blood 圧 モ デ ル ラ ッ ト で は normal ラ ッ ト と compare し て tyrosine receptor kinase B (TrkB) の ア イ ソ フ ォ ー ム で あ る TrkB T1 タ ン パ ク qualitative の 発 now が 脳 の depending on the bed in the front of the lower で hyperthyroidism し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. そ こ で は histological な gimmick this year に よ り, depending on the front of bed bottom の ど の cells で TrkB T1 タ ン パ ク qualitative の 発 now が hyperthyroidism し て い る の か を detailed analytical す に る た め の based な 検 line for を っ た. こ れ ま で with い て い た city vendor の TrkB は T1 antibody, immunohistochemical staining に は optimum さ な か っ た た め, new た な refined antibody を cropping し た. し か し こ の を refined antibody with い て も, 脳 に お け る TrkB T1 の specific な 発 now は 検 out で き な か っ た. ま た, Western blotting に よ り normal ラ ッ ト の 脳 organization に お け る 発 も now beg し 検 た が, cropping し た を refined antibody with い て TrkB T1 の 発 now を 検 out す る こ と は out な か っ た. さ ら に, デ ー タ ベ ー ス を with い て TrkB T1 posthumous son 伝 を inhibitory に suppression す る こ と が to think さ れ る マ イ ク ロ RNA を shows し た. こ の マ イ ク ロ RNA を に HEK293T cells before turning 発 now さ の せ, cell culture supernatant か ら extracellular small cell (マ イ ク ロ RNA を contains a large number of に む と exam え ら れ る) を 単 from し て high blood 圧 disease モ デ ル ラ ッ ト の depending on the front of bed bottom に cast with し た. そ の results, turning 発 line now を っ て い な い の HEK293T cell culture clear origin の extracellular vesicular を cast with し た group と compare し て, 収 shrink blood 圧 が low す る tendency を shown し た. Above よ り, high blood 圧 モ デ ル ラ ッ ト で は depending on the bed bottom front high 発 で す now る TrkB T1 が systemic blood 圧 の rise を suppression す る こ と と, こ れ に マ イ ク ロ RNA が masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. そ の た め, 脳 の TrkB ア イ ソ フ ォ ー ム 発 is の - は, future study に の よ り high blood 圧 disease に お け る new た な to prevent, treat の mark と な る こ と が expect さ れ る.

项目成果

北里大学獣医薬理学研究室

北里大学兽医药理实验室

北里大学・獣医学部・獣医薬理学研究室

北里大学兽医学院兽医药理学实验室

Age-dependent alteration in expression of brain-derived neurotrophic factor and its receptors in central nervous system of spontaneously hypertensive rats

自发性高血压大鼠中枢神经系统脑源性神经营养因子及其受体表达的年龄依赖性变化

• 发表时间: 2018
• 作者: Kosuke Otani;Muneyoshi Okada;Hideyuki Yamawaki
• 通讯作者: Hideyuki Yamawaki

正常ラット多臓器におけるTrkBアイソフォーム発現

TrkB同工型在正常大鼠多个器官中的表达

• 发表时间: 2017
• 作者: 大谷 紘資;岡田 宗善;山脇 英之
• 通讯作者: 山脇 英之