The protective immune effect on bovine leukemia virus infection by selective activating the NK cell

选择性激活NK细胞对牛白血病病毒感染的保护性免疫作用

• 批准号: 22K15013
• 负责人: 三苫 修也
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15013/
• 关键词: 牛IL-2; CD122; IL-2変異体; IL-2 complex; Bovine leukemia virus; Natural killer (NK) cell

インターロイキン２（IL-2）はT細胞やN K細胞を刺激し免疫を賦活化したり制御性T細胞を誘導し免疫を抑制したりと様々な活性を持つ。牛伝染性リンパ種ウイルス（BLV）に感染し持続性リンパ球増多症（PL）を発症した牛では血中のCD4T細胞から産生されるIL-2量が減少していることから、B L V感染細胞を排除する防御免疫を担うCD８T細胞やNK細胞の増殖に必要なIL-2の不足が推察される。一方で、T細胞由来のIL-2がPL発症牛のB細胞増殖を促進させることも報告されている。本研究の目的は、免疫の賦活化や抑制と様々な活性を持つIL-2を標的とし牛IL-2複合体等を作製しその作用機序を解明することで、選択的なNK細胞増殖を誘導し、BLVのような難治性ウイルス感染症に対して有効な免疫賦活化できるか探索することである。まずは、牛におけるIL-2作用機序を解析するツール作りから試みた。今回、牛IL-2-IL-2受容体の結合能を評価するためのIL-2受容体各サブユニット（CD25・CD122・CD132）持続発現細胞を樹立した。また、IL-2を表面に持続発現させた細胞も樹立した。これは可溶性各IL-2受容体サブユニットとの結合を評価するために用いる。また、IL-2に対する各細胞サブセットの反応強度を推測する際に重要なCD122の牛における発現を調べていく必要があるが、牛IL-2受容体ベータ鎖（CD122）モノクローナル抗体が存在しないため、今回マウス抗牛CD122モノクローナル抗体を作製した。また、牛におけるIL-2変異体の基礎データ及び研究がないためヒト及びマウスでCD25との結合部位と予測されている部位を標的に９つの牛IL-2変異体を作製し、精製に成功した。

IL-2 stimulates and activates T cells and NK cells, inhibits and inhibits T cell activation. In cattle infected with BLV, IL-2 production in the blood of CD4 T cells is reduced, and in cattle infected with BLV, IL-2 deficiency is necessary for the proliferation of CD8 T cells and NK cells. IL-2, the origin of T cells, promotes the proliferation of B cells in PL patients. The aim of this study was to elucidate the mechanism of immune activation and inhibition of IL-2 activity by IL-2 complex, and to explore the role of BLV in the induction of NK cell proliferation and refractory infections. The mechanism of IL-2 action was analyzed. In this paper, IL-2 receptor binding energy was evaluated and IL-2 receptor cells (CD25, CD122, CD132) were established. The expression of IL-2 was detected by cell culture. The soluble IL-2 receptor was evaluated for its ability to bind. It is important to modulate the expression of CD122 when IL-2 is involved in the prediction of the intensity of response of each cell site. IL-2 receptor (CD122) is involved in the production of anti-CD122 anti-CD122 antibodies. The basic structure and research of IL-2 variant were studied successfully. The binding site of CD25 and the predicted site of IL-2 variant were studied successfully.

项目成果

Development of droplet digital PCR for quantification of bovine leukemia virus proviral load using unpurified genomic DNA

开发使用未纯化的基因组 DNA 定量牛白血病病毒原病毒载量的液滴数字 PCR

• DOI: 10.1016/j.jviromet.2023.114706
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Virological Methods
• 影响因子: 3.1
• 作者: Wu Xinyue;Notsu Kousuke;Matsuura Yuichi;Mitoma Shuya;El Daous Hala;Norimine Junzo;Sekiguchi Satoshi
• 通讯作者: Sekiguchi Satoshi