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トランスジェニックから探るアブラムシ細胞内共生系の分子基盤

通过转基因探索蚜虫内共生系统的分子基础

基本信息

批准号：
22K15169
负责人：
依田真一
金额：
$ 2.91万
依托单位：
National Institute for Basic Biology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15169/
关键词：
アブラムシ細胞内共生遺伝子導入 piggyBac 共生トランスジェニック

项目摘要

今年度はエンドウヒゲナガアブラムシにおいてトランスジェニックシステムを確立するために、DNAベクター(piggyBacトランスポゾン) を用いた遺伝子導入法の構築を行った。まず、初期胚で高活性なプロモーター配列を特定するために、蛍光タンパク質上流にプロモーター候補配列を挿入したdonor plasmidを作製し、初期胚にインジェクションした。リアルタイムPCRによって蛍光タンパク質の発現を定量したところ、2種類のプロモーターが初期胚で高活性を示すことがわかった。遺伝子導入個体を作出するために、helperとして改変型piggyBacであるhyper-active piggyBac transposase (hyPBase) を用いてdonor plasmidと一緒に初期胚にインジェクションした。Helperはプラスミド、またはin vitro転写したmRNAとして供給した。その結果、未だ系統化には至っていないものの、発生途中で死亡したG0世代を解析したところ1.4%の割合でモザイク個体が含まれていることがわかった。さらにアブラムシに最適な蛍光タンパク質について検討したところ、アブラムシ卵は緑色の波長域で自家蛍光を発する一方、赤色の波長域では自家蛍光がほとんど見られないことがわかった。そのため、緑色のGFPよりも赤色のDsRedやmCherryなどの蛍光タンパク質の方が遺伝子導入のマーカー遺伝子として適していることが示唆された。アブラムシ卵の孵化率を上げるために、アブラムシ卵へのインジェクション技術についても改良を行った。具体的には、ガラスキャピラリー先端の研磨法と卵のホルマリン処理による防カビ法を確立した。

This year, the DNA template (piggyBac template) was constructed by gene introduction method. In the early stage of the embryo, the high activity of the donor plasma is determined by the donor plasma. The detection of DNA by PCR was quantified, and the activity of DNA in the early stage was high. The donor plasmid is introduced into the host cell to help the host cell to transform into a hyperactive piggyBac transporter (hyPBase). Helper is not in vitro. The result is that the system is not systematic, and the death is on the way to life. The generation is analyzed. The 1.4% of the population is divided into two groups. In addition, the green wavelength domain and the red wavelength domain are the two most suitable wavelength domains for light emission. Green, Green, Red, Cherry, Green, Green, The hatchability of eggs is increasing, the hatchability of eggs is decreasing, and the technology of eggs is improving. The specific method of grinding is to establish the method of prevention.