Analysis of multiple mechanisms of APP axonal transport

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アミロイド前駆体タンパク質(APP)はアルツハイマー病の原因因子アミロイドベータの前駆体であり、APP細胞内輸送の破綻はアミロイドベータの産生に寄与すると考えられている。APPが長い神経軸索を輸送される分子メカニズムは複数のモデルが存在しており、その全貌はいまだ明らかになっていない。本研究はAPPの軸索輸送について、これまでのモデルとは異なる輸送機構の解析を目的としたものである。本年度では、CAD細胞およびマウス大脳皮質初代培養神経細胞を用いたAPP-EGFPのライブイメージングによる解析を行った。まず、新規輸送機構に関する候補分子をノックダウンすることで、候補分子の関与を明らかにした。また、この新規分子と既知のAPP輸送関連分子を同時にノックダウンすることで、新規分子が既知の輸送機構とは独立した機構であることが示唆された。片方の輸送機構を阻害するだけではAPPの軸索輸送は止まらず、両方の輸送機構を阻害することでAPPの輸送が大きく減少することから、それぞれの機構が相補的である可能性が考えられる。それぞれの機構がどの程度実際のAPP輸送に寄与しているか解析を続けたい。同定した分子とAPPは免疫沈降による相互作用が確認されたが、直接結合するものではないと考えられた。APPと同定した分子のそれぞれで、各種の欠損変異体を作成し、相互作用に必要なドメインの探索を行った。APPと同定した分子の必要領域を絞り込むことができたが、間接的な相互作用を媒介する分子については、今後探索する必要がある。