Development of Novel Anti-Allergic Drug Using Strategic IgG Antibody Processing Technology

利用战略性IgG抗体加工技术开发新型抗过敏药物

• 批准号: 22K15280
• 负责人: 鈴木 瑠理子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15280/
• 关键词: マスト細胞; 単価ハプテン; Fc受容体; 細胞骨格; アレルギー; ハプテン; IgG

単価ハプテンによるマスト細胞活性化抑制機構解明のため、以下の実験を行った。・細胞内Caイオン濃度上昇抑制機構の解明単価ハプテンによる多価抗原刺激後の細胞内Caイオン濃度上昇の抑制が、小胞体からのCaイオンの遊離に影響を及ぼすかどうかを調べるために、mag-fluo4 AMを用いて測定を行った。その結果、単価ハプテンを添加した時点で、小胞体から細胞質へのCaイオンの遊離が停止することが明らかとなった。さらに、Caイオン排出ポンプにも影響を及ぼすかについて調べるために、PMCAの阻害剤のcarboxyeosin、NCK・NCKX阻害剤のKB-R7943を用いて細胞内Caイオン濃度測定を行うための実験系を確立した。・細胞骨格系タンパク質へ及ぼす影響の解明アクチン脱重合に関与するcofilinの活性（リン酸化レベル）を制御することが知られているLIMKinaseとslingshot (ホスファターゼ）に着目して実験を行った。cofilinは多価抗原刺激後１分前後で一時的に脱リン酸化（活性化）することはマスト細胞においても知られているが、多価抗原刺激後のslingshotとLIMKinaseの活性については不明であったため、まず、多価抗原後の各時点におけるリン酸化レベルの変化についてウエスタンブロット法にて検討を行った。その結果刺激１分前後でslingshotは脱リン酸化（活性化）することが確認された。一方で、LIMKは脱リン酸化（不活性化）することが確認され、この不活性化は少なくとも５分後まで持続した。そこで、多価抗原刺激後に単価ハプテンを添加した場合におけるこれらのタンパクへの影響を確認したところ、slingshot、LIMKは迅速にリン酸化されることが明らかとなり、単価ハプテンによりこれらのタンパク質の活性が迅速に変化することでcofilinの活性を制御することが示唆された。

进行了以下实验，以阐明单位价格触觉抑制肥大细胞激活的机制。 - 阐明抑制细胞内CA离子浓度上升的机制，以研究单位价格触发刺激后细胞内CA离子浓度的抑制是否会影响内质网的释放。结果，据揭示了加入单位价格触觉时从内质网释放到细胞质的释放。此外，为了研究这是否对CA离子外排泵有影响，建立了实验系统，以使用PMCA的抑制剂羧基蛋白（NCK/NCK/NCKX抑制剂）测量细胞内CA离子浓度。 - 阐明对细胞骨架蛋白的影响，我们进行了针对林木酶和弹弓（磷酸酶）的实验，这些实验已知可以调节Cofilin的活性（磷酸化水平），该活性涉及肌动蛋白去聚合。在多价抗原刺激后约一分钟后，在肥大细胞中也已知cofilin暂时去磷酸化（激活），但是在多价抗原刺激后，弹簧灵螺和林氨基酶的活性尚不清楚，因此首先检查了多价抗原后每个时间点的磷酸化水平的变化。结果，已经证实弹弓去磷酸化（激活）大约一分钟的刺激。另一方面，已经确认进行了肢体去磷酸化（灭活），并且这种失活持续了至少5分钟。因此，当我们在多价抗原刺激后添加单位价格触觉时确认对这些蛋白质的影响时，据表明，弹弓和LIMK被迅速磷酸化，表明单位价格触觉迅速改变了这些蛋白质的活性，从而控制了富有素的活性。

项目成果

マスト細胞のFc受容体の架橋状態の変化によるアクチン脱重合シグナル調節機構

肥大细胞Fc受体交联状态变化的肌动蛋白解聚信号调节机制

• 发表时间: 2023
• 作者: 鈴木 瑠理子;伊納 義和;横川 慧;古野 忠秀;平嶋 尚英
• 通讯作者: 平嶋 尚英

マスト細胞におけるアクチン重合・脱重合制御シグナル機構の研究

肥大细胞肌动蛋白聚合与解聚信号机制研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 鈴木 瑠理子;伊納 義和;横川 慧;古野 忠秀;平嶋 尚英
• 通讯作者: 平嶋 尚英

IgE受容体の架橋状態の変化によるマスト細胞のアクチンダイナミクス制御シグナル機構

通过 IgE 受体交联状态的变化控制肥大细胞肌动蛋白动力学的信号机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 鈴木 瑠理子;伊納 義和;横川 慧;古野 忠秀;平嶋 尚英
• 通讯作者: 平嶋 尚英