Search for neutralizing antibodies that recognize the S2 region of SARS-CoV-2 spike protein

寻找识别 SARS-CoV-2 刺突蛋白 S2 区域的中和抗体

• 批准号: 22K15284
• 负责人: 山本 雄一朗
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15284/
• 关键词: SARS-CoV-2; スパイクタンパク質; S2 subunit; 中和抗体

本研究では，特にS2領域を新規エピトープに持つSARS-CoV-2中和抗体に着目し，その抗体によるスパイクタンパク質の認識機構を詳細に解析し，感染阻害活性の発現メカニズムを明らかにすることを目的とする．我々はこれまでに武漢型と変異株のSARS-CoV-2の間でアミノ酸変異が少ないRBD領域，S2領域をエピトープとする複数のマウスモノクローナル抗体（CvMab-6，-62）を同定している．そこで今年度は，これらの抗体において，武漢型および変異型スパイクタンパク質を発現する組換えシュードタイプウイルスを作製し，中和活性を評価した．また，SARS-CoV-2スパイクタンパク質への親和性を確認するために,武漢型および変異型スパイクタンパク質を過剰発現させたHEK293T細胞を用いて，各種スパイクタンパク質への反応性をWestern Blotting，免疫蛍光染色にて評価した．さらに2種類の抗体と武漢株およびオミクロン株の3量体組換えスパイクタンパク質との結合親和性をELISA法にて評価した．抗S2抗体であるCvMab-62は，抗RBD抗体CvMab-6と比較して，武漢型シュードタイプウイルスに対する中和活性が高かった．しかしながら，CvMab-62の中和活性は，変異型シュードタイプウイルスでは中和活性が減弱する傾向が確認された．一方で，CvMab-62はオミクロン型を含めた変異株スパイクタンパク質を認識し，武漢株およびオミクロン株いずれにおいても，CvMab-6よりも10倍以上Kd値が低く，スパイクタンパク質との親和性が高いことが明らかとなった．以上の結果から，S2領域を標的としたCvMab-62は，スパイクタンパク質との結合親和性を向上させることにより，中和活性を増強させた可能性が示唆された．

This study で は, に を S2 field new rules エ ピ ト ー プ に hold 2 neutralizing antibody つ SARS - CoV - に mesh し, そ の antibody に よ る ス パ イ ク タ ン パ ク の know institutions を detailed analytical し に, infection resistance against active の 発 now メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. Type I 々 は こ れ ま で に wuhan と variations between different strains の SARS - CoV - 2 の で ア ミ ノ acid - different が less な い RBD area, S2 field を エ ピ ト ー プ と す る plural の マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (CvMab -, 6-62) with fixed し を て い る. そ こ で our は, "こ れ ら の antibody に お い て, wuhan type お よ び - alien ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative を 発 now す る group in え シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス し the を cropping systems, and active を review 価 し た. ま た, SARS - CoV - 2 ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative へ の affinity を confirm す る た め に, wuhan type お よ び - alien ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative を through turning 発 now さ せ た HEK293T cells を using い て, various ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative へ の anti 応 sex を Western Blotting, Immunological 蛍 light staining にて evaluation 価 た た. さ ら に の antibody と wuhan 2 species お よ び オ ミ ク ロ ン の 3 quantity body group in え ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative と の combined with affinity を ELISA method に て review 価 し た. Resistance to S2 antibody で あ る は CvMab - 62, RBD antibody CvMab - 6 と compare し て, wuhan type シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス に す seaborne る and high active が か っ た. し か し な が ら, の and active は CvMab - 62 - alien シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス で は neutralizing activity weakened が す る tendency が confirm さ れ た. One party で CvMab - 62 は オ ミ ク ロ ン type contains を め た - different strains ス パ イ ク タ ン パ ク を know し, wuhan plant お よ び オ ミ ク ロ ン strains い ず れ に お い て も, CvMab - 6 よ り も 10 times more Kd numerical が low く, ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative と の affinity が high い こ と が Ming ら か と な っ た. の above results か ら, S2 を mark と し た は CvMab - 62 ス パ イ ク タ ン パ ク qualitative と の combined with affinity を upward さ せ る こ と に よ り, strong and active を raised さ せ が た possibility in stopping さ れ た.

项目成果

SARS-CoV-2スパイクタンパク質のS2領域を認識する二重特異性中和抗体の探索

寻找识别 SARS-CoV-2 刺突蛋白 S2 区域的双特异性中和抗体

• 发表时间: 2022
• 作者: 井上徹哉;山本雄一朗;村江真奈;中村優子;小川基彦;深澤征義;金子美華;加藤幸成;野口耕司.
• 通讯作者: 野口耕司.

SARS-CoV-2に対する過酢酸の消毒効果の分子メカニズムの解析

过氧乙酸对SARS-CoV-2消毒作用的分子机制分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 山本雄一朗;村江真奈;清水芳実;酒井祥太;小川基彦;井上徹哉;中野義雄;宮崎智;深澤征義;野口耕司.
• 通讯作者: 野口耕司.

NMRを活用したSARS-CoV-2スパイクタンパク質とhACE2の相互作用を標的とするSARS-CoV-2侵入阻害化合物の分子設計

使用 NMR 进行针对 SARS-CoV-2 刺突蛋白和 hACE2 之间相互作用的 SARS-CoV-2 进入抑制化合物的分子设计

• 发表时间: 2023
• 作者: 横川真梨子;堀内まほろ;金一駿希;大竹帝河;米澤朋起;清水祐吾;池田和由;山本雄一朗; 酒井祥太;野口耕司;深澤征義;大澤匡範
• 通讯作者: 大澤匡範

分子動力学計算を用いたSARS-CoV-2 Spikeタンパク質の揺らぎ変化

使用分子动力学计算计算 SARS-CoV-2 刺突蛋白的波动变化

• 发表时间: 2023
• 作者: 中野義雄;近藤洋介;山本雄一朗;野口耕司;宮崎智.
• 通讯作者: 宮崎智.

SARS-CoV-2 スパイクタンパク質S2領域を標的とする二重特異性中和抗体の探索

寻找针对 SARS-CoV-2 刺突蛋白 S2 区域的双特异性中和抗体

• 发表时间: 2023
• 作者: 井上徹哉;山本雄一朗;村江真奈;中村優子;小川基彦;深澤征義;金子美華;加藤幸成;野口耕司.
• 通讯作者: 野口耕司.