Search for neutralizing antibodies that recognize the S2 region of SARS-CoV-2 spike protein

本研究では，特にS2領域を新規エピトープに持つSARS-CoV-2中和抗体に着目し，その抗体によるスパイクタンパク質の認識機構を詳細に解析し，感染阻害活性の発現メカニズムを明らかにすることを目的とする．我々はこれまでに武漢型と変異株のSARS-CoV-2の間でアミノ酸変異が少ないRBD領域，S2領域をエピトープとする複数のマウスモノクローナル抗体（CvMab-6，-62）を同定している．そこで今年度は，これらの抗体において，武漢型および変異型スパイクタンパク質を発現する組換えシュードタイプウイルスを作製し，中和活性を評価した．また，SARS-CoV-2スパイクタンパク質への親和性を確認するために,武漢型および変異型スパイクタンパク質を過剰発現させたHEK293T細胞を用いて，各種スパイクタンパク質への反応性をWestern Blotting，免疫蛍光染色にて評価した．さらに2種類の抗体と武漢株およびオミクロン株の3量体組換えスパイクタンパク質との結合親和性をELISA法にて評価した．抗S2抗体であるCvMab-62は，抗RBD抗体CvMab-6と比較して，武漢型シュードタイプウイルスに対する中和活性が高かった．しかしながら，CvMab-62の中和活性は，変異型シュードタイプウイルスでは中和活性が減弱する傾向が確認された．一方で，CvMab-62はオミクロン型を含めた変異株スパイクタンパク質を認識し，武漢株およびオミクロン株いずれにおいても，CvMab-6よりも10倍以上Kd値が低く，スパイクタンパク質との親和性が高いことが明らかとなった．以上の結果から，S2領域を標的としたCvMab-62は，スパイクタンパク質との結合親和性を向上させることにより，中和活性を増強させた可能性が示唆された．

本研究では，特にS2領域を新規エピトープに持つSARS-CoV-2中和抗体に着目し，その抗体によるスパイクタンパク質の認識機構を詳細に解析し，感染阻害活性の発現メカニズムを明らかにすることを目的とする．我々はこれまでに武漢型と変異株のSARS-CoV-2の間でアミノ酸変異が少ないRBD領域，S2領域をエピトープとする複数のマウスモノクローナル抗体（CvMab-6，-62）を同定している．そこで今年度は，これらの抗体において，武漢型および変異型スパイクタンパク質を発現する組換えシュードタイプウイルスを作製し，中和活性を評価した．また，SARS-CoV-2スパイクタンパク質への親和性を確認するために,武漢型および変異型スパイクタンパク質を過剰発現させたHEK293T細胞を用いて，各種スパイクタンパク質への反応性をWestern Blotting，免疫蛍光染色にて評価した．さらに2種類の抗体と武漢株およびオミクロン株の3量体組換えスパイクタンパク質との結合親和性をELISA法にて評価した．抗S2抗体であるCvMab-62は，抗RBD抗体CvMab-6と比較して，武漢型シュードタイプウイルスに対する中和活性が高かった．しかしながら，CvMab-62の中和活性は，変異型シュードタイプウイルスでは中和活性が減弱する傾向が確認された．一方で，CvMab-62はオミクロン型を含めた変異株スパイクタンパク質を認識し，武漢株およびオミクロン株いずれにおいても，CvMab-6よりも10倍以上Kd値が低く，スパイクタンパク質との親和性が高いことが明らかとなった．以上の結果から，S2領域を標的としたCvMab-62は，スパイクタンパク質との結合親和性を向上させることにより，中和活性を増強させた可能性が示唆された．