癌細胞特異的に発現するAspHを標的とした難治性癌有効な抗癌剤シード化合物の探索

以癌细胞中特异表达的 AspH 为靶点，寻找治疗难治性癌症的有效抗癌药物种子化合物

• 批准号: 22K15303
• 负责人: 中嶋 優
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15303/
• 关键词: 2OG依存性酸化酵素; AspH; 阻害剤; 漢方

富山大学和漢医薬学総合研究所が有する160種類の生薬抽出液および漢方方剤抽出液のライブラリーに対して、AspH阻害活性試験を実施した。構築したアッセイ系は、AspHが酵素反応中に放出するコハク酸を検出することに基づいており、試料中にAspH阻害剤が存在する場合に低下するコハク酸の生成量の検出を目的とする。まず、基質であるEGFD1、共基質である2OGおよび補因子である鉄イオンとアスコルビン酸を使用し、AspHに対する一次反応を実施した。次に、この反応生成物であるコハク酸を、ATPおよびCoAの存在下でSuccinyl-CoA Synthetase（SCS）によってSuccinyl-CoAに変換する二次反応を実施した。最後に、Malachite Green Phosphate Assay Kitを使用して、この反応で放出されたモノリン酸を検出する三次反応を実施した。この反応は、96ウェルプレートを使用した簡易的なスクリーニングに適しており、620 nmの吸光測定によるモノリン酸濃度依存的な検出が可能である。また、EGFD1は最低限のアミノ酸配列から構成される39残基のペプチドとして調製され、異種大腸菌にて大量発現および多段階精製によって高純度化した。同様に、AspHおよびSCSも異種大腸菌にて高純度化した。スクリーニングに使用する各抽出液は1 mg/ml、0.01 mg/ml、0.0001 mg/mlの異なる濃度で評価した。N-oxalylglycine（NOG）はAspHを含めた2OG依存性酸化酵素の共通阻害剤であるため、コントロールとしてNOGを100μMの濃度で使用した。結果として、ビャクシやブクリョウといった生薬、そして人参養栄湯といった漢方方剤抽出液が、濃度によってAspHの阻害活性を示すことが判明した。

Toyama University and the Institute of Medical Sciences and Medical Research Institute have a total of 160,000 kinds of crude extract, the prescription of extraction liquid, the prescription of extraction fluid, and the application of AspH antagonistic activity. In the enzyme reaction of AspH, the release of acid, the release of acid, the presence of AspH in the material, the production of acid, the production of acid. The EGFD1, the 2OG, the factor, the acid, the AspH, the acid, the acid, the acid The second, the reverse product, the acid, the ATP, the CoA, the Succinyl-CoA Synthetase (SCS), the Succinyl-CoA, the second anti-acid. At the end of the day, Malachite Green Phosphate Assay Kit made use of the device, and then let it out for three times. It is possible to use the absorptiometry of 620 nm to determine the acidity dependence of acidity. The minimum concentration of carbon dioxide and EGFD1 acid is determined to form a high-performance liquid chromatography with 39 residues, and a large number of strains of large bacteria can be used to detect multi-stage precision. In the same way, several kinds of SCS bacteria were tested in the same way as AspH and high-grade bacteria. Please use 1 mg/ml, 0.01 mg/ml, 0.0001 mg/ml of each extraction solution. N-oxalylglycine (NOG) "AspH" contains 2OG-dependent acidifying enzymes that are commonly used to inhibit the use of 2OG-dependent acidifying enzymes. Results the results showed that the inhibition activity of ginseng extract, AspH and ginseng was significantly higher than that of ginseng.