血管内皮障害に着目した薬剤性腎障害の発症機序の解明と新規治療戦略の確立

阐明药物性肾损伤发病机制并建立以血管内皮损伤为重点的治疗新策略

基本信息

批准号：
22K15342
负责人：
山田悠人
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15342/
关键词：
シスプラチン腎障害グリコカリックス血管内皮

项目摘要

本研究はシスプラチンによる薬剤性腎障害の発症メカニズムについて、血管内腔のグリコカリックス（GLX）に着目し、GLXの脱落が薬剤性腎障害の発症および重篤化に及ぼす影響について検討するものである。2022年度はGLXノックアウトマウスを用いてGLXの脱落が組織へのシスプラチン移行を助長し、薬剤性腎障害を誘発する仮説を立証するため、まずは血中、尿中、組織中のシスプラチン濃度測定系の構築を行った。これまで報告された測定法を参考に、有機溶媒を用いた除タンパク法と逆相条件でのHPLC-MS/MSを用いたシスプラチンの測定系の構築に着手した。逆相カラムで水およびメタノールの移動相条件でシスプラチンのイオン化効率を確認したが、酸性（pH=4）・中性(pH=7)・塩基性(pH=9)条件いずれもシスプラチンのイオン化効率を確認したところ、酸性条件下の方がイオン化効率がよいことが分かった。その他にもアセトニトリルへの変更や、酢酸アンモニウムやギ酸アンモニウム等の緩衝液の追加など様々な移動相条件で検討したが、最も感度良く測定できた0.2%ギ酸入りアセトニトリルと0.2%ギ酸入り水を用いた移動相条件でも定量限界は約10μg/mLであった。マウスにシスプラチンを投与した際の想定される下限濃度は約0.1μg/mLg/mLであり、実検体の測定は難しいことが予想された。そのため、現在はジエチルジチオカルバミン酸を用いたシスプラチンを誘導体化に着目し、より高感度に測定できる系の確立を行っている。

这项研究的重点是发展Cyplatin诱导的肾损伤的机制，该机制的重点是血管腔中的糖蛋白损伤（GLX），并研究了GLX掉落对化学治疗诱导的肾脏损伤的发作和严重程度的影响。在2022财年，我们首先构建了一个系统，用于测量血液，尿液和组织中的顺铂浓度，以确定GLX下降的假设促进顺铂促进顺铂转移到组织并诱导药物诱导的肾脏损伤。基于先前报道的测量方法，我们在反向相条件下使用有机溶剂和HPLC-MS/MS开始构建顺铂测量系统。在反向相柱上的水和甲醇的流动相条件下，证实了顺铂的电离效率，当在酸性（pH = 4）下证实顺铂的电离效率确认，中性（pH = 7），碱性（pH = 9），在酸性条件下确认了顺铂的电离效率。其他研究是在各种流动相条件下进行的，例如更改为乙腈，并添加缓冲液，例如乙酸铵和甲酸铵甲酸铵，但是即使在使用0.2％甲酸和0.2％甲酸的乙腈的流动相条件下，也是最敏感的测量，这是最敏感的测量限制，定量的限制约为10μg/ml。将顺铂施用到小鼠时的预期下限浓度约为0.1μg/mlg/ml，预计实际样品的测量很困难。因此，我们目前正在使用双硫代氨基酸酸来衍生化顺铂，并建立一个可以更灵敏的系统。