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カニクイザルES細胞を用いた減数分裂期卵母細胞の試験管内誘導

使用食蟹猴 ES 细胞体外诱导减数分裂卵母细胞

基本信息

批准号：
22K15380
负责人：
茂谷小百合
金额：
$ 3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

生殖細胞系譜は始原生殖細胞に由来する。当研究室では、ヒトiPS細胞を起点として始原生殖細胞様細胞（Primordial germ cell-like cell, PGCLC）へ、さらにPGCLCを胎生期12日目のマウス胎児卵巣体細胞と凝集培養すること（以下、再構成卵巣法）により卵原細胞様細胞へ誘導することに成功しているが、ヒト再構成卵巣法の場合、減数分裂期へ移行した卵母細胞の分化誘導は実現していない。さらにヒトでは、誘導された卵子の受精能及び受精卵の個体発生能を検証することは倫理的に不可能であることから、ヒトに代わるモデル生物での生殖細胞発生過程の試験管内再構成系構築が必要不可欠である。そこで、本研究課題ではヒトと近縁な非霊長類モデルカニクイザルを用いて雌性生殖細胞を試験管内で誘導することを目的とし研究を行った。本年度は、前年度に構築した「2ステップ再構成卵巣法（1段階目で卵原細胞様細胞へ、2段階目で卵母細胞様細胞へ誘導する方法）」により得られた卵母細胞様細胞の性状解析を行った。まず、1細胞トランスクリプトーム解析により、卵母細胞様細胞は減数分裂初期のカニクイザル胎児卵母細胞と類似の遺伝子発現プロファイルを有していた。また、EM-seq法により全ゲノムメチル化解析を実施したところ、卵原細胞様細胞、卵母細胞様細胞では顕著なDNA脱メチル化状態であることがわかった。さらに、本研究に用いたES細胞由来生殖細胞では、母方由来X染色体は父方由来に比して高いDNAメチル化状態にあること、母方X染色体における脱メチル化とX染色体再活性化の関連性を見出した。そして、ヒト再構成卵巣においても同様の傾向があることが分かった。以上の成果を前年度の成果と併せて、本年度末国際学術誌に発表した。

The origin of the original reproductive cells of the reproductive cell line is very different. When the laboratory iPS cells start from the original reproductive cells (Primordial germ cell-like cell) On the 12th day of gestation, PGCLC), the fetal oocytes were incubated by agglutination, the oocyte differentiation was induced by the method of oocyte formation, the oocyte differentiation was induced by the method of oocyte differentiation, and the oocyte differentiation was induced by the method of oocyte differentiation. The fertilized egg and the fertilized egg can be fertilized, and the fertilized egg can be fertilised. It is not possible to improve the fertility of the fertilized ovum and the fertilized egg. In this study, the purpose of this study is to conduct a study on the purpose of the study in recent years. The purpose of this study is to use the female reproductive cells to guide the cells in the tube. In this year and the previous year, the oocytes were reconstituted into oocytes by the method of reconstitution of oocytes (one oocyte primordial oocyte and two oocyte primordial oocytes). The type of oocyte in the early stage of meiosis is similar to that in the first stage of mitosis. In this paper, we use the method of EM-seq and EM-seq to analyze and analyze the situation in which the oocytes, oocytes and oocytes. In this study, we used the ES cell to reproduce the cell, the maternal origin of the X chromosome, the paternal origin of the X chromosome, the higher DNA of the mother, the deactivation of the maternal X chromosome, the reactivation of the X chromosome, and the reactivation of the X chromosome. If you don't know what to do, then you will form an egg. The above achievements were published in the previous year and at the end of this year.