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変異型ミトコンドリアDNAの排除機構の解明を目指した卵母細胞分化誘導系の構築

构建卵母细胞分化诱导系统，阐明突变线粒体DNA的消除机制

基本信息

批准号：
22KJ2101
负责人：
樋口智香
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2101/
关键词：
卵母細胞ミトコンドリア mtDNA 原始卵胞体外培養

项目摘要

2022年度は、卵細胞系列における変異型mtDNAの排除時期を明らかにすることを目的とし、変異型mtDNAをもつ人工多能性幹（iPS）細胞からの卵細胞分化誘導系の構築を行なった。（１）卵細胞分化誘導系の構築：これまでに作製したStella-tdTomatoレポーターをもつミトマウスΔiPS細胞を起点に、エピブラスト様細胞、始原生殖（PGC）様細胞への分化誘導を行った。続いて、PGC様細胞と胎仔卵巣体細胞との凝集培養により、PGC様細胞を卵細胞へと分化誘導した。その結果、卵細胞時期においてStella-tdTomatoの蛍光が確認され、また変異型mtDNAを持つ卵細胞を80-100個得ることができた。これらから、変異型mtDNAをもつiPS細胞からの卵細胞分化誘導系を構築することができた。（２）変異型mtDNAの割合の測定：上記で構築した分化誘導系により、iPS細胞、エピブラスト様細胞、PGC様細胞、卵母細胞分化誘導後の減数分裂移行期や、一次卵胞、及び二次卵胞に相当する各発生ステージにおいて単一細胞を回収した。これら発生ステージにおける変異型mtDNAの割合の測定を行った。（３）静止状態を模した原始卵胞の誘導：現在、所属グループで確立した方法に従い、酸素濃度(5%O2)と培養環境の外圧（33.3-100 kPa）を調整することで、成体内の静止状態を模した原始卵胞卵誘導を試みている。今後、この発生ステージにおける変異型mtDNAの割合の測定を行う予定である。

2022年年度报告，骨髓细胞系列造血干细胞分化型mtDNA去除周期明了且具有特异性的检测目的，骨髓细胞型mtDNA诱导人类多能性干细胞（iPS）分化细胞系的研究进展。(1)细胞分化诱导系实验：细胞分化诱导作实验用Stella-tdTomato细胞分化诱导剂，诱导产生ΔiPS细胞起点突变，诱导产生PGC细胞分化诱导行实验。采购规范，PGC胃癌细胞滋养体癌细胞集落采购申请，PGC胃癌细胞分化细胞集落采购申请。番茄，番茄细胞周期调控蛋白Stella-tdTomato番茄荧光素酶，番茄红素型mtDNA单链抗体80-100倍得率。细胞凋亡，线粒体型mtDNA诱导iPS细胞凋亡，细胞分化，细胞系凋亡，细胞凋亡。(2)线粒体型mtDNA切割复合体确定：上一级线粒体DNA切割分化体系鉴定要求，iPS细胞，诱导分化的线粒体DNA切割细胞，PGC细胞，母细胞分化的线粒体DNA切割数量各阶段鉴定，一次细胞，以及第二次细胞相应的线粒体生长发育正常，一次细胞回植。人类胚胎发育不全的哺乳动物的线粒体DNA切割融合确定性进行了鉴定。(3)静止状态下的静止型原始细胞增殖：静止在、属于静止型的静止型原始细胞增殖的建立方法，酸素浓度（5%O2）在缺氧环境下的外源性（33.3-100 kPa）的间歇性整饬，成形体内的静止型原始细胞增殖模型。因此，人类的生殖系统发育异常，线粒体型mtDNA切割融合缺陷行遗传给定殖细胞。