免疫応答におけるcGAS/STING/TBK1経路の新規制御機構の解明

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ウイルスや細菌由来の外来DNAを認識し、自然免疫応答を誘導する生体防御システムとしてcGAS/STING/TBK1経路が知られている。近年、この経路が細胞質に漏出した自己DNAに応答し、炎症病態を惹起して様々な自己免疫疾患の発症に関与することが報告されている。このシグナル伝達経路の中でTBK１は、上流シグナルが集約されるシグナル伝達ハブ分子にあたる。これまでの実験において、TBK1の結合分子スクリーニングを実施した結果、TBK1の新規結合候補分子Xを同定している。この分子Xは自己免疫疾患に関与することが示唆されており、当研究課題では、分子XによるTBK1の活性制御機構の解明と分子Xが関与するとされる自己免疫疾患の病態解明を目的としている。当該年度ではTBK1と分子Xの結合様式の解析を実施した。まず、TBK1と分子Xの遺伝子クローニングおよび両分子のドメイン変異体の作製を行った。次にそれらを培養細胞に過剰発現させた後に、結合解析実験として共免疫沈降実験を行った。その結果、TBK1と分子Xは互いのコイルドコイルドメインを介して相互作用していることが明らかとなった。また、培養細胞において、内在性レベルのTBK1と同じく内在性レベルの分子Xとの結合を分子Xの抗体を用いた共免疫沈降実験にて確認した。次年度以降に予定している動物個体レベルでの解析に必要となる分子Xの遺伝子ノックアウトマウスについては、実験群の確保のためにヘテロマウスを掛け合わせ繁殖を進めている。