膵癌の治療抵抗性に関わる責任遺伝子ANXA8の機能的意義の解明と治療応用

本年度は、ANXA8の発現に伴う細胞形質への影響の検証と、マウス皮下移植モデルにおけるANXA8標的療法の有効性の検証に取り組んだ。これまでの研究により、MAPK阻害薬に抵抗性の膵癌細胞株では、ANXA8の恒常的発現あるいはMAPK阻害薬処理による発現誘導が認められており、siRNAを用いてANXA8の発現を抑制すると、MAPK阻害薬に対する感受性が高まることを明らかにしている。そこで、まずはCRISPR/Cas9システムを用いてAMXA8ノックアウト細胞株を2株（PK-59KO、PK-1KO）樹立し、増殖能やMAPK阻害薬への感受性を調べた。元のANXA8のタンパク発現レベルがやや高いPK-1では、ANXA8のノックアウトによって、細胞増殖能が低下した。一方、元のANXA8のタンパク発現レベルがPK-1よりも低いPK-59では、ANXA8をノックアウトしても増殖能に大きな変化はみられなかった。また、PK-59細胞株では、ANXA8のノックアウトによってMAPK阻害薬処理後のアポトーシス能が亢進し、感受性が高まることを見出した。次に、樹立したPK-59KO株とその親株を用いてマウスに皮下移植し、腫瘍を形成した時点でMAPK阻害薬による治療実験を施行した。治療開始から3～4日毎に腫瘍の大きさを計測し、5週間後に腫瘍を摘出し重量を計測した。その結果、MAPK阻害薬治療群では未治療群と比較して顕著に腫瘍の増殖が抑制され、さらにANXA8をノックアウトしたPK-59KO株では、親株と比較して増殖抑制効果が高まる傾向が認められた。以上のことから、ANXA8は膵癌の治療標的分子として有効であることが示唆された。今後は、ANXA8の発現によって変動するシグナル経路の同定に進める計画である。

本年度は、ANXA8の発現に伴う細胞形質への影響の検証と、マウス皮下移植モデルにおけるANXA8標的療法の有効性の検証に取り組んだ。これまでの研究により、MAPK阻害薬に抵抗性の膵癌細胞株では、ANXA8の恒常的発現あるいはMAPK阻害薬処理による発現誘導が認められており、siRNAを用いてANXA8の発現を抑制すると、MAPK阻害薬に対する感受性が高まることを明らかにしている。そこで、まずはCRISPR/Cas9システムを用いてAMXA8ノックアウト細胞株を2株（PK-59KO、PK-1KO）樹立し、増殖能やMAPK阻害薬への感受性を調べた。元のANXA8のタンパク発現レベルがやや高いPK-1では、ANXA8のノックアウトによって、細胞増殖能が低下した。一方、元のANXA8のタンパク発現レベルがPK-1よりも低いPK-59では、ANXA8をノックアウトしても増殖能に大きな変化はみられなかった。また、PK-59細胞株では、ANXA8のノックアウトによってMAPK阻害薬処理後のアポトーシス能が亢進し、感受性が高まることを見出した。次に、樹立したPK-59KO株とその親株を用いてマウスに皮下移植し、腫瘍を形成した時点でMAPK阻害薬による治療実験を施行した。治療開始から3～4日毎に腫瘍の大きさを計測し、5週間後に腫瘍を摘出し重量を計測した。その結果、MAPK阻害薬治療群では未治療群と比較して顕著に腫瘍の増殖が抑制され、さらにANXA8をノックアウトしたPK-59KO株では、親株と比較して増殖抑制効果が高まる傾向が認められた。以上のことから、ANXA8は膵癌の治療標的分子として有効であることが示唆された。今後は、ANXA8の発現によって変動するシグナル経路の同定に進める計画である。