劇症肝炎治療法開発のためのB型肝炎ウイルスによる直接肝障害の機序の解明

阐明乙型肝炎病毒引起的直接肝损伤机制，用于开发暴发性肝炎的治疗方法

• 批准号: 22K15967
• 负责人: 内田 宅郎
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15967/
• 关键词: HBV; PC変異; BCP変異; ERストレス; HBV再活性化; ヒト肝細胞キメラマウス; Precore変異; Basal Core Promoter変異

B型慢性肝炎患者から得られたPrecore(PC)変異やBasal core promoter(BCP)変異を有するHBVの全配列を確認し、その1.4倍長のHBV配列をベクターにクローニングし、PC/BCP変異HBV発現プラスミドを作成した。さらには遺伝子改変技術を用いて、PCおよびBCP変異を野生型に変換したプラスミドも作成した。作成したプラスミドをHepG2細胞にトランスフェクションし、分泌されたHBVを回収・濃縮した。得られた4種類のHBV（PC/BCP変異、PC変異、BCP変異、野生型）をヒト肝細胞キメラマウスおよびPXB細胞に感染させたところ、PC/BCP変異型で確認されたウイルスの高増殖、および肝細胞の消失はキャンセルされ、BCP/PC 変異が肝細胞の直接障害に重要であることが確認された。一方、野生型およびPC/BCP変異型HBV感染マウスの肝臓サンプルを用いて、RNAseqを行い、遺伝子発現解析を行ったところ、野生型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較し て 87 遺伝子に発現の変化を認め、二重変異型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較 して 100 遺伝子に変化を認めた。エンリッチメント解析から G2/M チェックポイント、ER ストレス応答、アポトーシス に関わるパスウェイが二重変異型 HBV 感染マウスでのみ確認され、ERストレスを介したアポトーシスが誘導されていることを明らかにした。その成果を国際学会などで発表し、論文化した。

确认了从患有慢性乙型肝炎患者的患者获得的携带前孔（PC）和基础核心启动子（BCP）突变的HBV的整个序列，并确认HBV序列将HBV序列更长的1.4倍克隆到载体中以创建PC/BCP突变体HBV HBV表达质粒。此外，还使用遗传修饰技术生成质粒，以将PC和BCP突变转换为野生型。将产生的质粒转染到HEPG2细胞中，并收集并浓缩分泌的HBV。当获得的四种类型的HBV（PC/BCP突变，PC突变，BCP突变，野生型）被人肝细胞嵌合小鼠和PXB细胞感染时，PC/BCP突变的高度增殖和肝细胞的消失证实了hepatocy的消失，bcp/pc PC突变很重要。另一方面，使用野生型和PC/BCP突变体HBV感染的小鼠进行RNASEQ进行RNASEQ，并进行基因表达分析。在野生型HBV感染的小鼠中，与未感染的对照小鼠相比，在87个基因中观察到表达变化，在双突感染的HBV感染的小鼠中，与未感染的对照小鼠相比，在双突出的HBV感染小鼠中观察到了100个基因。富集分析表明，仅在双重突出的HBV感染的小鼠中证实了参与G2/M检查点，ER应力反应和凋亡的途径，并且诱导了ER应力介导的凋亡。结果是在国际学术会议和其他地方提出的，讨论是由它们组成的。

项目成果

Basal core promoterおよびprecore変異型HBVは小胞体ストレス応答を介し肝細胞を直接障害する

基底核心启动子和前核心突变型HBV通过内质网应激反应直接损伤肝细胞

• 发表时间: 2023
• 作者: 内田宅郎;今村道雄;岡志郎
• 通讯作者: 岡志郎

ACCUMULATION OF HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN PROVOKES ER STRESS MEDIATED CELL DEATH IN BASAL CORE PROMOTER AND PRECORE MUTATED HEPATITIS B VIRUS INFECTION

乙型肝炎表面抗原的积累引起基础核心启动子和前核心突变乙型肝炎病毒感染中ER应激介导的细胞死亡

• 发表时间: 2022
• 作者: Takuro Uchida;Michio Imamura;Yuji Teraoka,Hatsue Fujino,Takashi Nakahara,Atsushi Ono,Eisuke Murakami,Masami Yamauchi,Tomokazu Kawaoka,Daiki Miki,Hiromi Abe-Chayama,C. Nelson Hayes;Hiroshi Aikata,Yuji Ishida,Chise Tateno,HoJoong Song,Yohei Miyayama,Mako
• 通讯作者: Hiroshi Aikata,Yuji Ishida,Chise Tateno,HoJoong Song,Yohei Miyayama,Mako