劇症肝炎治療法開発のためのB型肝炎ウイルスによる直接肝障害の機序の解明

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B型慢性肝炎患者から得られたPrecore(PC)変異やBasal core promoter(BCP)変異を有するHBVの全配列を確認し、その1.4倍長のHBV配列をベクターにクローニングし、PC/BCP変異HBV発現プラスミドを作成した。さらには遺伝子改変技術を用いて、PCおよびBCP変異を野生型に変換したプラスミドも作成した。作成したプラスミドをHepG2細胞にトランスフェクションし、分泌されたHBVを回収・濃縮した。得られた4種類のHBV（PC/BCP変異、PC変異、BCP変異、野生型）をヒト肝細胞キメラマウスおよびPXB細胞に感染させたところ、PC/BCP変異型で確認されたウイルスの高増殖、および肝細胞の消失はキャンセルされ、BCP/PC 変異が肝細胞の直接障害に重要であることが確認された。一方、野生型およびPC/BCP変異型HBV感染マウスの肝臓サンプルを用いて、RNAseqを行い、遺伝子発現解析を行ったところ、野生型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較し て 87 遺伝子に発現の変化を認め、二重変異型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較 して 100 遺伝子に変化を認めた。エンリッチメント解析から G2/M チェックポイント、ER ストレス応答、アポトーシス に関わるパスウェイが二重変異型 HBV 感染マウスでのみ確認され、ERストレスを介したアポトーシスが誘導されていることを明らかにした。その成果を国際学会などで発表し、論文化した。