劇症肝炎治療法開発のためのB型肝炎ウイルスによる直接肝障害の機序の解明

阐明乙型肝炎病毒引起的直接肝损伤机制，用于开发暴发性肝炎的治疗方法

• 批准号: 22K15967
• 负责人: 内田 宅郎
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15967/
• 关键词: HBV; PC変異; BCP変異; ERストレス; HBV再活性化; ヒト肝細胞キメラマウス; Precore変異; Basal Core Promoter変異

B型慢性肝炎患者から得られたPrecore(PC)変異やBasal core promoter(BCP)変異を有するHBVの全配列を確認し、その1.4倍長のHBV配列をベクターにクローニングし、PC/BCP変異HBV発現プラスミドを作成した。さらには遺伝子改変技術を用いて、PCおよびBCP変異を野生型に変換したプラスミドも作成した。作成したプラスミドをHepG2細胞にトランスフェクションし、分泌されたHBVを回収・濃縮した。得られた4種類のHBV（PC/BCP変異、PC変異、BCP変異、野生型）をヒト肝細胞キメラマウスおよびPXB細胞に感染させたところ、PC/BCP変異型で確認されたウイルスの高増殖、および肝細胞の消失はキャンセルされ、BCP/PC 変異が肝細胞の直接障害に重要であることが確認された。一方、野生型およびPC/BCP変異型HBV感染マウスの肝臓サンプルを用いて、RNAseqを行い、遺伝子発現解析を行ったところ、野生型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較し て 87 遺伝子に発現の変化を認め、二重変異型 HBV 感染マウスでは、非感染対照マウスと比較 して 100 遺伝子に変化を認めた。エンリッチメント解析から G2/M チェックポイント、ER ストレス応答、アポトーシス に関わるパスウェイが二重変異型 HBV 感染マウスでのみ確認され、ERストレスを介したアポトーシスが誘導されていることを明らかにした。その成果を国際学会などで発表し、論文化した。

The complete HBV alignment was confirmed in patients with chronic hepatitis B from Precore(PC) to Basal core promoter(BCP), and the HBV alignment of 1.4 times longer than PC/BCP was established. Today, genetic modification technology is used to transform PC and BCP into wild types. To prepare the HepG2 cell culture medium, the HBV secretion medium was concentrated. Four types of HBV (PC/BCP variant, PC variant, BCP variant, wild-type) were identified in the presence of HBV infection in PXB cells, and PC/BCP variant was identified in the presence of HBV infection in PXB cells. One side, wild-type, PC/BCP heterotypic HBV infection, two sides, RNAseq, gene expression analysis, wild-type HBV infection, non-infectious control, 87 gene expression, double heterotypic HBV infection, non-infectious control, 100 gene expression, double heterotypic HBV infection. The analysis of HBV infection in patients with hepatitis B virus (HBV) infection is based on G2/M, ER and ER analysis. The International Society for the Advancement of Science and Culture

项目成果

Basal core promoterおよびprecore変異型HBVは小胞体ストレス応答を介し肝細胞を直接障害する

基底核心启动子和前核心突变型HBV通过内质网应激反应直接损伤肝细胞

• 发表时间: 2023
• 作者: 内田宅郎;今村道雄;岡志郎
• 通讯作者: 岡志郎

ACCUMULATION OF HEPATITIS B SURFACE ANTIGEN PROVOKES ER STRESS MEDIATED CELL DEATH IN BASAL CORE PROMOTER AND PRECORE MUTATED HEPATITIS B VIRUS INFECTION

乙型肝炎表面抗原的积累引起基础核心启动子和前核心突变乙型肝炎病毒感染中ER应激介导的细胞死亡

• 发表时间: 2022
• 作者: Takuro Uchida;Michio Imamura;Yuji Teraoka,Hatsue Fujino,Takashi Nakahara,Atsushi Ono,Eisuke Murakami,Masami Yamauchi,Tomokazu Kawaoka,Daiki Miki,Hiromi Abe-Chayama,C. Nelson Hayes;Hiroshi Aikata,Yuji Ishida,Chise Tateno,HoJoong Song,Yohei Miyayama,Mako
• 通讯作者: Hiroshi Aikata,Yuji Ishida,Chise Tateno,HoJoong Song,Yohei Miyayama,Mako