Targeting liver fibrosis with CAR-T cells

CAR-T 细胞靶向治疗肝纤维化

• 批准号: 22K15982
• 负责人: 付 慶傑
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15982/
• 关键词: CAR T療法; 膵臓星細胞; 膵癌; 星細胞; 肝線維化; CARーT 細胞療法

本研究は、CAR-T細胞の特異的な除去によって活性化した肝星細胞が除去された後、肝線維症が改善されるかどうかを検討することを目的としている。固定されたマウスの肝星細胞および人間のLX2細胞株において、免疫蛍光染色によりFAPの発現が観察されたが、しかし、活細胞染色では細胞表面で明確なFAPの発現は観察されず、また、マウス肝星細胞に対するWestern BlotでもFAPの発現は極めて少ないことが示された。さらに、マウスNASHモデルまたはCCl4誘発の肝線維症モデルのいずれにおいても、肝線維化領域でのFAPの高発現は病理検査により検出されていない。したがって、人間の肝線維症において活性化された肝星細胞がFAPを過剰発現することが広く報告されているにもかかわらず、マウスの肝線維症モデルではFAP CAR T療法の実験に適していない事が明らかになった。肝星細胞の他に、膵臓にも星状細胞の一群が存在し、膵癌発症時にはがん関連線維芽細胞（CAF）として活性化する。膵臓星細胞も活性化後にFAPを発現すると報告されており、我々も膵臓星細胞表面で特異的に高発現するFAPを検出した。このため、膵臓星細胞の発現するFAPを標的としたCAR-T細胞療法の膵癌治療における潜在的な可能性について検討した。まず、CAR T細胞がFAP過剰発現の陽性対照およびFAP非発現の陰性対照の線維芽細胞を攻撃することにより、CAR T細胞の攻撃効果と特異性を確認した。その後、FAP CAR-T細胞を活性化したマウス膵臓星細胞に対して攻撃性を評価し、星細胞がCAR T細胞によって効果的に攻撃されることを確認した。最後に、星細胞と腫瘍細胞の共培養が腫瘍細胞の増殖を促進することが確認された上で、共培養システムにCAR T細胞を加え、CAR T細胞が星細胞を殺傷することで腫瘍細胞の増殖を有意に抑制することが確認された。

这项研究旨在检查通过特异性去除CAR-T细胞去除活化的肝星状细胞后是否改善了肝纤维化。免疫荧光染色观察到固定小鼠肝星状细胞和人LX2细胞系中的FAP表达，但是在细胞表面没有明显的FAP表达，并有活性细胞染色，并且还表明，FAP表达在小鼠肝星酸星状星状细胞上的Western blot中也非常低。此外，在小鼠NASH模型或CCL4诱导的肝纤维化模型中，尚未通过病理测试检测到肝纤维化区域的FAP高表达。因此，尽管广泛报道了在人肝纤维化中激活的肝星状细胞过表达FAP，但已经发现小鼠肝纤维化模型不适合进行FAP CAR T治疗的实验。除肝脏星状细胞外，胰腺中还有一组星形胶质细胞，它们在胰腺癌发展后被激活为与癌症相关的成纤维细胞（CAF）。胰腺星状细胞也已据报道在激活后表达FAP，我们还检测到FAP，该FAP在胰腺星状细胞的表面高度表达。因此，我们研究了胰腺癌细胞在胰腺癌治疗中靶向FAP的CAR-T细胞疗法的潜力。首先，通过在表达阳性和非FAP表达阳性对照中攻击成纤维细胞的攻击效果和特异性证实。然后，我们评估了激活FAP CAR-T细胞的小鼠胰腺胰腺细胞的攻击性，并确认星形胶质细胞受到CAR T细胞有效攻击。最后，已经证实，星形胶质细胞和肿瘤细胞的共培养会促进肿瘤细胞的增殖，并将CAR T细胞添加到共培养系统中，并且CAR T细胞杀死了星形胶质细胞，从而显着抑制了肿瘤细胞的增殖。