B型肝炎ウイルス・C型肝炎ウイルス共感染時における線維化進展加速機構の解明

阐明乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒混合感染期间加速纤维化进展的机制

• 批准号: 22K16042
• 负责人: 村井 一裕
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16042/
• 关键词: HBV; HCV; 共感染; scRNAseq; ヒト肝細胞キメラマウス; ISG; single cell RNA sequence; 星細胞

ヒト肝細胞キメラTK-NOGマウスより単離した初代培養ヒト肝細胞(PHH)2Lotに対してB型肝炎ウイルス(HBV)を感染させた。HBV感染10日後に1Lotにつき10000 cellsを回収し、single cell RNA sequenceを施行した。HBV RNA陽性細胞比率はそれぞれ63.4%、67.0%であった。HBV RNA陽性細胞とHBV RNA陰性細胞で有意に発現が異なる遺伝子をそれぞれ342遺伝子、30遺伝子抽出し、2Lotで共通する遺伝子を5遺伝子抽出した。次にC型肝炎ウイルス(HCV)感染ヒト肝細胞キメラTK-NOGマウスの肝組織を用いてsingle cell RNA sequenceを施行した。HCV感染11週後のマウスとHCV感染8週後から3週間抗ウイルス治療を施行し、HCVを排除したマウスそれぞれ1匹ずつを用いて解析を施行した。それぞれ肝組織を擬似灌流法を用いて11380cells、10532cellsを回収し、single cell RNA sequenceを施行した。回収した細胞は3つのクラスターに区別されたがhAlb、HLA-A、TK(チミジンキナーゼ)の発現量からヒト肝細胞分画を同定することが可能であった。さらにヒト肝細胞を擬似時系列解析を行うとHCV感染肝細胞とHCV排除後肝細胞を区別することができ、2つの分画の遺伝子発現を比較するとMX1、IIFIT1、ISG15といった細胞内自然免疫の発現に有意な差を認めた。次にB型肝炎関連肝癌患者2名の非腫瘍部と肝移植ドナー患者2名の外科手術検体を用いてsingle cell RNA sequenceを施行した。合計10654細胞を回収したが、うち肝細胞は76細胞、星細胞も81細胞しか同定することができなかった。肝細胞や星細胞はサンプル調整の行程でほぼ死滅してしまうことが明らかになった。

从人肝细胞嵌合TK-NOG小鼠中分离出的原发性培养的人肝细胞（PHH）2LOT被感染了丙型肝炎病毒（HBV）。 HBV感染后10天收集10,000个细胞，并进行单个细胞RNA序列。 HBV RNA阳性细胞比分别为63.4％和67.0％。在HBV RNA阳性和HBV RNA阴性细胞中分别提取342和30基因的基因，并提取了5个批次共有的5个基因。接下来，使用肝炎病毒（HCV）感染的人肝细胞嵌合TK-NOG小鼠的肝组织进行单细胞RNA序列。 HCV感染后，在HCV感染后8周进行抗病毒治疗3周，并使用一只小鼠分析，每只小鼠不包括HCV。使用模拟灌注方法从肝组织中收集11380细胞和10532细胞，并进行了单个细胞RNA序列。将回收的细胞区分为三个簇，但可以从HALB，HLA-A和TK（胸苷激酶）的表达水平中鉴定出人肝细胞级分。此外，通过对人肝细胞进行模拟时间序列分析，可以区分HCV感染的HCV感染的肝细胞和HCV排除的肝细胞，以及在两个馏分中比较基因表达时，在两个部分中的基因表达时，在细胞内的天生免疫中的表达显着差异，例如MX1，ISG1555。然后使用两个非肿瘤区域的乙型肝炎肝癌患者和两名肝移植供体患者的手术标本进行单细胞RNA序列。总共收集了10,654个细胞，但只有76个肝细胞和81个星形胶质细胞也能够识别。据表明，在样品制备过程中，肝细胞和星状细胞几乎被杀死。

项目成果

Single cell RNA sequence using the liver tissue derived from humanized liver chimeric mice infected hepatitis C virus

使用感染丙型肝炎病毒的人源化肝嵌合小鼠的肝组织进行单细胞 RNA 序列

• 发表时间: 2022
• 作者: Kazuhiro Murai;Hayato Hikita;Kumiko Shirai;Hiroshi Suemizu;Kunimaro Furuta;Takahiro Kodama;Ryotaro Sakamori;Tomohide Tatsumi;Tetsuo Takehara
• 通讯作者: Tetsuo Takehara