B型肝炎ウイルス・C型肝炎ウイルス共感染時における線維化進展加速機構の解明

阐明乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒混合感染期间加速纤维化进展的机制

• 批准号: 22K16042
• 负责人: 村井 一裕
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16042/
• 关键词: HBV; HCV; 共感染; scRNAseq; ヒト肝細胞キメラマウス; ISG; single cell RNA sequence; 星細胞

ヒト肝細胞キメラTK-NOGマウスより単離した初代培養ヒト肝細胞(PHH)2Lotに対してB型肝炎ウイルス(HBV)を感染させた。HBV感染10日後に1Lotにつき10000 cellsを回収し、single cell RNA sequenceを施行した。HBV RNA陽性細胞比率はそれぞれ63.4%、67.0%であった。HBV RNA陽性細胞とHBV RNA陰性細胞で有意に発現が異なる遺伝子をそれぞれ342遺伝子、30遺伝子抽出し、2Lotで共通する遺伝子を5遺伝子抽出した。次にC型肝炎ウイルス(HCV)感染ヒト肝細胞キメラTK-NOGマウスの肝組織を用いてsingle cell RNA sequenceを施行した。HCV感染11週後のマウスとHCV感染8週後から3週間抗ウイルス治療を施行し、HCVを排除したマウスそれぞれ1匹ずつを用いて解析を施行した。それぞれ肝組織を擬似灌流法を用いて11380cells、10532cellsを回収し、single cell RNA sequenceを施行した。回収した細胞は3つのクラスターに区別されたがhAlb、HLA-A、TK(チミジンキナーゼ)の発現量からヒト肝細胞分画を同定することが可能であった。さらにヒト肝細胞を擬似時系列解析を行うとHCV感染肝細胞とHCV排除後肝細胞を区別することができ、2つの分画の遺伝子発現を比較するとMX1、IIFIT1、ISG15といった細胞内自然免疫の発現に有意な差を認めた。次にB型肝炎関連肝癌患者2名の非腫瘍部と肝移植ドナー患者2名の外科手術検体を用いてsingle cell RNA sequenceを施行した。合計10654細胞を回収したが、うち肝細胞は76細胞、星細胞も81細胞しか同定することができなかった。肝細胞や星細胞はサンプル調整の行程でほぼ死滅してしまうことが明らかになった。

The primary culture of TK-NOG cells (PHH), 2Lot cells (hepatitis B), hepatitis B (HBV), infection (HBV). Ten days after HBV infection, 1Lot infection was followed by 10000 cells cycles, and single cell RNA sequence infection was performed. The sex cell ratio of HBV RNA was 63.4% and 67.0% respectively. HBV RNA, and 2Lot are intended to show that there are 342, 30, and 5 knots in the same cell. Subtype C hepatitis virus (HCV) infection was detected in the liver cells. The liver tissue was detected by single cell RNA sequence. The liver tissue was detected by single cell RNA sequence. After 11 years of HCV infection, the treatment of anti-HCV infection was carried out after 8 weeks of HCV infection, and the treatment was performed by HCV analysis. The liver tissue of the control group was perfused with 11380cells, 10532cells and single cell RNA sequence. HAlb, HLA-A, TK in different areas were measured. The liver cells were divided into two parts. After the HCV infection was excluded by HCV, the liver cells were divided into two groups, and the results of MX1, IIFIT1 and ISG15T intracellular natural immunity were significantly higher than those of the control group (P < 0.05). 2 patients with secondary hepatitis B, 2 patients with liver cancer, 2 patients with liver transplantation, 2 patients with surgical surgery, 2 patients with secondary hepatitis B, 2 patients with liver cancer, 2 patients with liver transplantation, 2 patients with secondary hepatitis B, 2 patients with liver cancer, 2 patients with liver transplantation, 2 patients with secondary hepatitis B, 2 patients with liver cancer and 2 patients with liver transplantation. A total of 10654 cells were collected, including 76 cells, 81 cells and 81 cells. The liver cell

项目成果

Single cell RNA sequence using the liver tissue derived from humanized liver chimeric mice infected hepatitis C virus

使用感染丙型肝炎病毒的人源化肝嵌合小鼠的肝组织进行单细胞 RNA 序列

• 发表时间: 2022
• 作者: Kazuhiro Murai;Hayato Hikita;Kumiko Shirai;Hiroshi Suemizu;Kunimaro Furuta;Takahiro Kodama;Ryotaro Sakamori;Tomohide Tatsumi;Tetsuo Takehara
• 通讯作者: Tetsuo Takehara