Elucidation of a novel mechanism mediated by pH-sensitive TDAG8 in bronchial asthma

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本研究では、気管支喘息の治療標的とされてきたサイトカインが関わる気道炎症とは異なるpH感知性受容体であるT-cell death-associated gene8(TDAG8)を介した新たな喘息のメカニズムを明らかにして治療標的となりうるかを検証することを目的としている。これまでの研究でOvalbumin誘導喘息モデルマウスにおいてTDAG8が好酸球性炎症、気道粘液産生に関与する事が判明したことを発展させて、3年間の計画で以下の2つの研究を行う予定である。①細胞レベルで気道上皮細胞おいて低pH環境およびTDAG8が気道粘液産生に関与するメカニズムを明らかにする。②ヒトレベルで気管支喘息においてTDAG8の発現と臨床指標との関連を明らかにする。2022年度は、気道粘液の構成成分であるMucin5AC(MUC5AC)産生において低pH環境が与える影響について、HEPES bufferの緩衝下に塩酸でpHを調整したRPMI1640培養液を用いて気道上皮細胞株(NCI-H292)をpH 6～7で培養し、Phorbol 12-myristate13-acetate刺激によるMUC5AC発現量を評価したところ、NCI-H292細胞株のPMA刺激によるMUC5AC発現が低pH環境において上昇することを確認した。また、siRNAを用いて同細胞株においてTDAG8をノックダウンできることを確認した。現在、低pH環境によるMUC5AC発現の上昇がTDAG8をノックダウンすることで変化する現象について実験を繰り返し行い、再現性を確認している。また、ヒトレベルにおいてTDAG8発現が気管支喘息の臨床指標とどのように関連しているかについては、研究期間を通じて臨床検体および情報の収集を進めている。収集した検体の一部はカラム法を用いてmRNAを抽出し、RT-PCR法によりcDNAにした。今後は、検体が集まったところで、real time PCR法でTDAG8発現量を評価することを予定している。