Elucidating excessive fibrosis in systemic sclerosis via abnormal IRF8 expression

①骨髄特異的IRF8ノックアウトマウス（IRF8cKOマウス）の肺組織について評価を行った。(i)まず、無治療のIRF8cKOマウスと野生型マウスの肺組織の比較を行った。IRF8cKOマウスで肺の線維化は認めず、同マウスは肺において線維化を自然発症しないと考えた。(ii)次に、線維化を誘導するためにブレオマイシンの投与を行った。ブレオマイシンの投与経路については、背部の皮下投与および気管内投与の2種類の方法を採用した。肺組織については、重量、病理組織、qRT-PCR、総コラーゲン量測定（ヒドロキシプロリンアッセイ）によって線維化の評価を行った。皮下投与においては野生型マウスと比較してIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進は見られなかった。気管内投与においても一部でIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進を示唆する所見は見られたものの、野生型と比して統計学的に有意な線維化誘導は認めなかった。②今後の組織からのマクロファージ抽出を念頭に、皮膚や肺組織について組織からの細胞抽出の予備実験を行った。マウスの皮膚、肺についてコラゲナーゼを用いて組織の溶解を行ったが、特に皮膚において分解に難渋したたため、条件の最適化にむけて実験を継続する。③今後の線維芽細胞との共培養を念頭に、ヒト単球におけるIRF8のノックダウンについて予備実験を行った。siRNAを用いたRNA干渉法によるノックダウンを行った。これまで当教室で使用しておりノックダウン方法が確立した試薬の販売停止に伴い、新たな試薬を用いて条件検討を行った。ノックダウン効率がまだ低いため、今後も最適化のための実験を継続する。

①骨髄特異的IRF8ノックアウトマウス（IRF8cKOマウス）の肺組織について評価を行った。(i)まず、無治療のIRF8cKOマウスと野生型マウスの肺組織の比較を行った。IRF8cKOマウスで肺の線維化は認めず、同マウスは肺において線維化を自然発症しないと考えた。(ii)次に、線維化を誘導するためにブレオマイシンの投与を行った。ブレオマイシンの投与経路については、背部の皮下投与および気管内投与の2種類の方法を採用した。肺組織については、重量、病理組織、qRT-PCR、総コラーゲン量測定（ヒドロキシプロリンアッセイ）によって線維化の評価を行った。皮下投与においては野生型マウスと比較してIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進は見られなかった。気管内投与においても一部でIRF8cKOマウスにおいて線維化の亢進を示唆する所見は見られたものの、野生型と比して統計学的に有意な線維化誘導は認めなかった。②今後の組織からのマクロファージ抽出を念頭に、皮膚や肺組織について組織からの細胞抽出の予備実験を行った。マウスの皮膚、肺についてコラゲナーゼを用いて組織の溶解を行ったが、特に皮膚において分解に難渋したたため、条件の最適化にむけて実験を継続する。③今後の線維芽細胞との共培養を念頭に、ヒト単球におけるIRF8のノックダウンについて予備実験を行った。siRNAを用いたRNA干渉法によるノックダウンを行った。これまで当教室で使用しておりノックダウン方法が確立した試薬の販売停止に伴い、新たな試薬を用いて条件検討を行った。ノックダウン効率がまだ低いため、今後も最適化のための実験を継続する。