遺伝子改変マウスを用いたEVI1高発現白血病の下流標的の探索
使用转基因小鼠寻找高 EVI1 表达的白血病下游靶点
基本信息
- 批准号:22K16297
- 负责人:
- 金额:$ 2.91万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
- 财政年份:2022
- 资助国家:日本
- 起止时间:2022-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
CRISPR-Cas9 systemを用いて、3×FLAGタグをEvi1遺伝子の3’ 端にノックインしたマウスを作製した。この遺伝子改変マウスを用い、anti-FLAG抗体でCleavage Under Targets & Release Using Nucleaseシークエンス(CUT&RUN-seq)を施行し、Evi1の下流標的を網羅的に探索した。まずは同マウスでEvi1を発現しているLineage 陰性、c-kit陽性、Sca-1 陽性(LSK)分画においてCUT&RUN-seqを行うことで、正常造血モデルにおいて網羅的にEvi1の下流標的を探索した。さらにそのマウスの骨髄細胞にMLL-ENL、cMyc-bcl2といったEVI1を高発現するAMLを発症する遺伝子をレトロウイルスで導入した。この細胞を二次移植することにより内因性のEVI1が高発現となる急性骨髄性白血病(AML)マウスモデルを作成し、同様にanti-FLAG抗体でCUT&RUN-seqを行った。両者の結果をGene Set Enrichment Analysis(GSEA)等で検討比較した。その結果Evi1高発現白血病特異的に上昇するEvi1のターゲット遺伝子の候補を複数得た。現在まずはin vitroでそれら候補遺伝子の評価を行っている。具体的には、Evi1高発現の白血病細胞株においてこれらの遺伝子をノックアウトしてその増殖、分化等の評価を行っている。
The CRISPR-Cas9 system was produced by 3×FLAG Evi1 and 3×FLAG Evi1.この伝子 modify 変マウスを用い, anti-FLAG antibody でCleavage Under Targets & Release Using Nuclease シークエンス(CUT&RUN-seq)をexecutionし, Evi1の下注的を综合的にExplorationした.まずは Same as マウスでEvi1を発行しているLineage negative, c-kit positive, Sca-1 Positive (LSK) is divided into においいCUT&RUN-seq を行うことで, normal hematopoietic モデルにおいて net and にEvi1's downstream target をExploration した. MLL-ENL, cMyc-bcl2 and MLL-ENL EVI1を高発成するAMLを発性する伝子をレトロウイルスで Importした.このcellをSecond transplantationすることによりIntrinsicのEVI1が高発appearsとなるAcute bone marrow leukemia (AML) ) MASHIMARA is produced, and the same anti-FLAG antibody is produced as CUT&RUN-seq. The results of these studies were compared using Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) and others.そのRESULTS Evi1 high leukemia-specific にriseするEvi1のターゲット伝子の candidateを plural getた. Now it's in vitroでそれら candidate addendum 伝子の comment価を行っている. Specific には, Evi1 high-rise leukemia cell lines においてこれらの伝子をノックアウトしてその multiply, differentiate, etc.の Comment価を行っている.
项目成果
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