遺伝子改変マウスを用いたEVI1高発現白血病の下流標的の探索

使用转基因小鼠寻找高 EVI1 表达的白血病下游靶点

• 批准号: 22K16297
• 负责人: 千葉 晶輝
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16297/
• 关键词: 急性骨髄性白血病; 造血幹細胞; 正常造血; EVI1; AML

CRISPR-Cas9 systemを用いて、3×FLAGタグをEvi1遺伝子の3’ 端にノックインしたマウスを作製した。この遺伝子改変マウスを用い、anti-FLAG抗体でCleavage Under Targets & Release Using Nucleaseシークエンス(CUT&RUN-seq)を施行し、Evi1の下流標的を網羅的に探索した。まずは同マウスでEvi1を発現しているLineage 陰性、c-kit陽性、Sca-1 陽性（LSK）分画においてCUT&RUN-seqを行うことで、正常造血モデルにおいて網羅的にEvi1の下流標的を探索した。さらにそのマウスの骨髄細胞にMLL-ENL、cMyc-bcl2といったEVI1を高発現するAMLを発症する遺伝子をレトロウイルスで導入した。この細胞を二次移植することにより内因性のEVI1が高発現となる急性骨髄性白血病（AML）マウスモデルを作成し、同様にanti-FLAG抗体でCUT&RUN-seqを行った。両者の結果をGene Set Enrichment Analysis(GSEA)等で検討比較した。その結果Evi1高発現白血病特異的に上昇するEvi1のターゲット遺伝子の候補を複数得た。現在まずはin vitroでそれら候補遺伝子の評価を行っている。具体的には、Evi1高発現の白血病細胞株においてこれらの遺伝子をノックアウトしてその増殖、分化等の評価を行っている。

CRISPR-Cas9 system is used in the middle, 3×FLAG and 3 ′-terminal of Evi1 gene. Anti-FLAG antibody Cleavage Under Targets & Release Using Nuclease (CUT&RUN-seq) is implemented and Evi1's downstream targets are explored. Evi1 is detected in the same way as C-kit and Sca-1 (LSK). Cut&RUN-seq are detected in the same way as normal hematopoiesis. The expression of MLL-ENL, cMyc-bcl2 and EVI1 in AML cells is highly expressed. The cells were transplanted twice, and the intrinsic EVI1 was found to be highly active in acute osteoblastic leukemia (AML). The anti-FLAG antibody CUT&RUN-seq was also produced. Gene Set Enrichment Analysis(GSEA) and other methods are discussed. The results showed that Evi1 had a high incidence of leukemia-specific rise, and Evi1 had a high incidence of leukemia-specific rise and a high incidence of leukemia-specific rise. Now it's in the vitro. It's in the vitro. Specifically, Evi1 highly developed leukemia cell lines were evaluated for their proliferation and differentiation.