革新的なHLA遺伝子異常解析に基づく造血幹細胞移植後再発の機序解明への挑戦

基于创新HLA基因异常分析阐明造血干细胞移植后复发机制的挑战

• 批准号: 22K16332
• 负责人: 吉川 枝里
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16332/
• 关键词: HLA; 移植; AML; MDS; NGS; 発現解析; 血液腫瘍; 移植後再発

[研究背景]本研究の目的は、がん根治を目指すために、移植後再発に関わる免疫逃避の要因の一つであるHLA発現低下の機序を明らかにすることである。具体的には、造血幹細胞移植後に再発が認められた症例を対象に、HLA発現変化の特徴付けやその変化をもたらす遺伝子異常要因の同定を行い、その結果をもとに、HLA発現低下に伴う再発の機序解明を目指す。[研究実績]移植後に再発したAMLまたはMDS患者7例の初診時と移植後再発時の凍結骨髄細胞から、腫瘍細胞と正常細胞をソーティングにより分離した。分離した腫瘍細胞分画について、メイギムザ染色の塗抹標本を作製し100%が腫瘍細胞であることを確認した。得られた細胞から抽出したRNAに対し、次世代シークエンサーを用いてHLA遺伝子12座の発現解析を行った。その結果、7例中6例で移植後にHLA遺伝子の発現低下が認められ、特にクラスII遺伝子群の発現低下が著しく、全症例においてDQ遺伝子の低下が認められた。発現低下の特徴は個々に異なり、片側アレルの発現欠失やDQ遺伝子の完全な発現欠落などが見られた。次に、移植前後で発現量に差があった症例について、次世代シークエンサーを用いてRNAおよびDNAの塩基配列を決定し、配列異常の有無を確認した。その結果、一部の症例でHLA遺伝子のDNA配列上にLOH （loss of heterozygosity）や終止コドン置換を確認し、発現低下の主要因がDNA配列の異常であることが示唆された。以上から、移植後に再増殖した腫瘍細胞におけるHLA発現の特徴として特にHLA-DQ遺伝子の発現が低下する傾向にあることが示唆された。一部の症例ではDNA配列異常が発現低下の要因であることが明らかになったが、その他の症例における発現低下の要因についてはまだ不明である。

は] [research background of this study の purpose, が ん radical を refers す た め に, again after transplantation 発 に masato わ る immune escape の by の a つ で あ る HLA 発 now low の machine sequence を Ming ら か に す る こ と で あ る. Specific に は again, after hematopoietic stem cell transplantation に 発 が recognize め ら れ た cases を like に seaborne, HLA 発 now - の 徴 pay especially け や そ の variations change を も た ら す heritage 伝 abnormalities in line with fixed を の い, そ の results を も と に again and low HLA 発 now に う 発 の machine sequence interpret を refers す. Be performance [research] に 発 again after transplantation し た AML ま た は 7 patients with MDS の と to begin with when 発 の frozen bone marrow cells after transplantation か ら, swollen sores と normal cells を ソ ー テ ィ ン グ に よ り separation し た. Separation し た swollen sores cells points draw に つ い て, メ イ ギ ム ザ dyeing の daub the specimen を cropping し 100% が swollen sores cells で あ る こ と を confirm し た. Have ら れ た cells か ら spare し た RNA に し seaborne, next generation シ ー ク エ ン サ ー を with い て HLA heritage 伝 son 12 の 発 now line analytical を っ た. そ の results, 7 cases, 6 cases で に HLA heritage after transplantation 伝 son の 発 now low が recognize め ら れ, に ク ラ ス II legacy 伝 subgroup の 発 now low が the し く cases, whole に お い て low DQ son survived 伝 の が recognize め ら れ た. Low 発 is の, 徴 は a 々 に different な り, piece side ア レ ル の 発 now owe lost や DQ heritage 伝 の completely な 発 now owe fall な ど が see ら れ た. に, before and after transplantation で 発 now poor quantity に が あ っ た cases に つ い て, next generation シ ー ク エ ン サ ー を with い て RNA お よ び DNA の を decided し salt base with column, column have abnormal の without を confirm し た. そ の results, a の で HLA heritage 伝 の with DNA sequence on に LOH (loss of heterozygosity) や termination コ ド ン replacement を confirm し, low 発 is の mainly with abnormal DNA match column の が で あ る こ と が in stopping さ れ た. Above か ら, に again raised after transplantation colonization し た swollen sores cells に お け る HLA 発 is の, 徴 と し て に HLA DQ - especially heritage 伝 son の 発 now low が す る tendency に あ る こ と が in stopping さ れ た. Two cases a の で は abnormal DNA match column が 発 now low の by で あ る こ と が Ming ら か に な っ た が, そ の cases he の に お け る 発 low is の by に つ い て は ま だ unknown で あ る.