ヒトiPS細胞を用いたPM/DM筋組織における自然免疫活性化機序の解明

使用人 iPS 细胞阐明 PM/DM 肌肉组织中的先天免疫激活机制

• 批准号: 22K16358
• 负责人: 長谷川 久紀
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16358/
• 关键词: ヒトiPS細胞由来筋細胞; ヒトiPS細胞由来CD8T細胞; 多発性筋炎; ヒト筋細胞-CD8T細胞-共培養系; 筋細胞傷害; 多発性筋炎/皮膚筋炎; ヒトiPS細胞; 筋傷害; 筋細胞-CD8T細胞-マクロファージ混合培養

多発性筋炎/皮膚筋炎(PM/DM)では、病態に非特異的な既存の免疫抑制療法に対し副作用や治療抵抗性を示す症例が多く、病態に基づいた新規治療薬の開発が重要である。当研究室は、自己免疫性筋炎の発症には、細胞傷害性CD8T細胞(CTL)だけでなく、筋局所の自然免疫活性化も必須であることを示しているが、PM/DM患者の筋病変に浸潤しているマクロファージ(Mψ) や筋細胞自体の自然免疫活性化への寄与の理解は十分でない。本研究では、ヒトiPS細胞(hiPSC)由来筋細胞を抗原特異的に傷害するCTLの系に対してMψを混合培養し、Mψや筋細胞自体がCTLの筋細胞傷害能に与える影響の検証からPM/DMの病態解明を目指す。PM/DMの病態特異的な抗原は同定されていないため、日本人の約60%がヘテロで有するHLA-A*24:02の特異抗原であるWT1ペプチドと、WT1特異的再生CTL(rCTL)に着目した(Cancer Res 2016;76:6839)。京都大学河本宏先生よりWT1特異的rCTLをいただき、HLA-A*24:02陽性の抗原提示細胞(LCL)を用い、再生CTLを当研究室でも増殖・活性化させた。次に、当研究室で樹立済みのPM患者由来hiPSCのHLAを解析し、HLA-A*24:02陽性であった1例のhiPSCに対し筋原生転写因子MyoDを導入して、高率に筋細胞へと分化可能なMyoD強発現hiPSCバルクを樹立し、適宜筋細胞へ分化させ、活性化したWT1特異的rCTLとWT1存在下で共培養することで、CTLによる筋細胞傷害を誘導できた。また、CTLによる筋細胞傷害がHLA拘束性で抗原特異的であることも確認した。今後、hiPSCからMψも分化させ、hiPSC由来の筋細胞-CTL- Mψの混合培養系でのrCTLの筋細胞傷害能の変化から、Mψや筋細胞の自然免疫活性化への寄与を考察する。

Multiple tendinitis/dermatositis (PM/DM) is a disease that is not specific to existing immunosuppressive therapies and shows resistance to treatment. When the laboratory studies the pathogenesis of autoimmune tendinitis, it is necessary to understand the cytotoxic CD8 T cells (CTL) and the natural immune activation of tendon cells in PM/DM. In this study, we investigated the effects of mixed culture on antigen-specific injury of iPS cells (hiPSC) from muscle cells and CTL system on the pathogenesis of PM/DM. The pathology-specific antigens for PM/DM are identified in approximately 60% of Japanese and HLA-A*24:02 specific antigens are identified in WT1 and WT1 specific regenerative CTL(rCTL)(Cancer Res 2016;76:6839). Mr. Hiroshi Kawamoto, Kyoto University WT1-specific rCTL, HLA-A*24:02-positive antigen prompt cells (LCL), regeneration CTL, proliferation and activation in the laboratory Secondly, when the laboratory analyzed the HLA of hiPSCs from established PM patients, one case was HLA-A*24:02-positive and the native writing factor MyoD was introduced into the hiPSCs. MyoD was strongly promoted in the establishment of hiPSCs at a high rate of tendon cell differentiation, suitable for tendon cell differentiation, and co-cultured with activated WT1-specific rCTL WT1, which induced tendon cell damage in CTLs. CTL is the most important factor in HLA binding and antigen-specific injury. In the future, the differentiation of hiPSC, the transformation of injury ability of rCTL in mixed culture line of hiPSC derived tendon cells-CTL- M, and the natural immune activation of M + T cells will be investigated.