大腸癌に対するがん免疫療法における革新的治療予測バイオマーカーの探索

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大腸癌における治療効果バイオマーカー探索のため、まず大腸癌症例979例の臨床病理学的因子を調査した。StageIV症例198例を含む手術療法、化学療法症例の予後を解析し、免疫染色を行うためのサンプルづくりを実施した。本研究において解析する因子についてもこの時点で整理した。まず、免疫学的背景を分類するため、以前の研究より当科で行っているCD3、CD4、CD8、FOXP3の免疫染色を行い、ハイブリッドセルカウンター、BZ-Xを用いて陽性リンパ球数のカウントを行った。こちらは腫瘍先進部３視野のリンパ球数の平均値を算出する方法で、データごとの差異が最小限にとどまるよう工夫し、これまでも同様の手法を用いて報告している。腫瘍浸潤リンパ球数と予後の関連性を解析すると、CD3、CD8、FOXP3低発現群で有意に予後が不良であるという結果が得られ、一方でCD4陽性リンパ球においては有意差を認めなかった。これらの解析と並行して、大腸癌肝転移症例181例を抽出しており、現在DNA抽出、real-time PCR、免疫染色などの実験準備を進めている。次に、本研究の中核的解析であるMSI-H症例の探索を行った。大腸癌組織の凍結標本よりDNAを抽出し、ベセスダ分類に則ってBAT25、BAT26というMSIのマーカーを用いたPCRを行い、DNAシークエンサーで解析を実施した。Microsatelliteの反復回数に変化がある症例をMSI症例、変化がない症例をMSS症例とし、256例の解析を行った。256例中、MSI-Hの結果を得たものは30例（11.7％）であり、過去の報告に合致する結果が得られた。現在、本研究結果に基づき、MSI-H群 vs MSS群に分類し、臨床病理学的特徴の解析、前述の腫瘍浸潤リンパ球数との関連性について解析を進めている。