癌関連線維芽細胞の細胞老化を標的とするがん微小環境制御と胃癌腹膜播種治療への応用

靶向癌症相关成纤维细胞衰老控制癌症微环境及其在胃癌腹膜播散治疗中的应用

基本信息

批准号：
22K16542
负责人：
竹内昭博
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16542/
关键词：
癌関連線維芽細胞細胞老化微小環境胃癌腹膜播種 CEACAM1

项目摘要

これまで我々は膜貫通型糖蛋白で接着分子であるCEACAM1に着目した多数の癌腫と形態変化との関連について，また大腸癌浸潤先進部における癌細胞巣とCAFsの発現についての研究を行ってきた．CEACAM1 cDNAがpHβAPr-1にクローニングされた既存のplasmid (BGPa/pHβ)をE.coli DH5αで調製して胃癌培養株NUGUC3に導入、同様に、CEACAM1 shRNAをコードするcDNAがpGeneClip Neomycin Vectorにクローニングされた既存のplasmid(SureSilencing shRNA Plasmid for Human CEACAM1)を胃胞癌培養株MKN7に導入し、遺伝子導入した胃癌細胞株を，NOD-scidマウスの皮下，腹腔内に接種し，CEACAM1 isoform発現の強弱により，腫瘍の浸潤や形態がどのように変化するかを検討した.（動物実験計画、遺伝子組み換え実験計画については承認を得ている）さらに腫瘍組織像における腫瘍細胞とCAFsとの関連を共染色にて評価した.胃癌細胞株におけるCEACAM1発現の違いによるEMTマーカー（E-カドヘリン、Ｎ-カドヘリン、ビメンチン）など発現変化をウエスタンブロッティング法を用いて評価した.ただし,今回の検討において胃癌におけるEMTマーカーやCEACAM1発現とCAFsとの有意な関係性を評価するには至っていない.したがって,今後は胃癌における組織型や肉眼型など詳細な分類を行い、類似疾患や症例でのCAFsマーカーの発現に注目して研究を進めていくとともに,胃癌臨床検体を用いて胃癌細胞とCAFsとの相互シグナル伝達の解明のために準備を進めていく.

到目前为止，我们已经研究了许多癌与形态学变化，重点是CEACAM1，跨膜糖蛋白和粘附分子，以及在结肠癌侵袭的晚期区域中癌细胞灶和CAF的表达。将CeCAM1 cDNA克隆到pHβAPR-1中的现有质粒（BGPA/PHβ）用大肠杆菌DH5α制备，并引入胃癌培养菌株NUGUC3。同样，将编码CeCAM1 shRNA的cDNA的现有质粒（对人CECAM1进行的shRNA质粒克隆到Pgeneclip neymycin载体中被引入胃癌培养菌株MKN7中，并将其内形上的腹膜固定液引入了胃癌培养菌株MKN7，并将其固定的转化为内部膜片。我们研究了肿瘤侵袭和形态如何根据同工型表达的强度变化。（对动物实验设计和遗传改性的实验设计的批准）此外，通过共染色评估了肿瘤细胞与CAF之间的关联。由于胃癌细胞系中CEACAM1表达的差异，我们使用了Western印迹来改变EMT标记（E-钙粘蛋白，N-钙粘蛋白，波形蛋白）的表达。但是，在这项研究中，我们尚未评估胃癌和CAF中EMT标记与CEACAM1表达之间的显着关系。因此，将来，我们将对胃癌的组织学类型和总体类型进行详细分类，并继续我们的研究重点关注类似疾病和病例中CAFS标记的表达，并将继续准备使用临床胃癌标本来阐明胃癌细胞和CAF之间的相互信号传导。