ウイルス感染症後遺症による神経炎症の分子機構の解明

COVID19の後遺症が慢性疲労症候群/筋痛症性脳脊髄炎と呼ばれる症状に似ていることから、ウイルス感染後の慢性疲労症候群あるいは線維筋痛症の病態モデルとなることに着目した。本研究ではヒト線維芽細胞種SH-SY5Y細胞とヒトミグログリア細胞株HMC3細胞にSARS-CoV-2の主たる構成蛋白質であるspike proteinを遺伝子導入して発現させ、細胞障害を評価することを目的とした。SARS-CoV-2 Spike Gene plasmidをSino Biological社から入手し、plasmid prepにてplasmidを精製した。精製したplasmidをリポフェクチン (Promega, FuGENE HD) でトランスフェクションを行った。まずは神経系の細胞よりも、より発現しやすいHeLa細胞でトランスフェクションを試みた。トランスフェクション後24時間後と48時間後に細胞を回収して、spike protein抗体によるウエスタンブロットを行ったところspike proteinのバンドが検出され、トランスフェクションが成功したことが確認できた。またトランスフェクション後24時間後と48時間後のspike protein量を比較したところ、48時間後は24時間後の40倍濃いバンドが検出されたことから、HeLa細胞内でspike proteinが増殖されたことが確認できた。次回はSH-SY5Y細胞やHMCなどの神経細胞にトランスエクションして、神経細胞でもトランスフェクションができるのか、またspike proteinの増殖が観察されるのかを検討していく。

COVID19の後遺症が慢性疲労症候群/筋痛症性脳脊髄炎と呼ばれる症状に似ていることから、ウイルス感染後の慢性疲労症候群あるいは線維筋痛症の病態モデルとなることに着目した。本研究ではヒト線維芽細胞種SH-SY5Y細胞とヒトミグログリア細胞株HMC3細胞にSARS-CoV-2の主たる構成蛋白質であるspike proteinを遺伝子導入して発現させ、細胞障害を評価することを目的とした。SARS-CoV-2 Spike Gene plasmidをSino Biological社から入手し、plasmid prepにてplasmidを精製した。精製したplasmidをリポフェクチン (Promega, FuGENE HD) でトランスフェクションを行った。まずは神経系の細胞よりも、より発現しやすいHeLa細胞でトランスフェクションを試みた。トランスフェクション後24時間後と48時間後に細胞を回収して、spike protein抗体によるウエスタンブロットを行ったところspike proteinのバンドが検出され、トランスフェクションが成功したことが確認できた。またトランスフェクション後24時間後と48時間後のspike protein量を比較したところ、48時間後は24時間後の40倍濃いバンドが検出されたことから、HeLa細胞内でspike proteinが増殖されたことが確認できた。次回はSH-SY5Y細胞やHMCなどの神経細胞にトランスエクションして、神経細胞でもトランスフェクションができるのか、またspike proteinの増殖が観察されるのかを検討していく。