ウイルス感染症後遺症による神経炎症の分子機構の解明

阐明病毒感染后遗症引起神经炎症的分子机制

• 批准号: 22K16588
• 负责人: 神 久予
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16588/
• 关键词: SARS-CoV-2; spike protein; COVID-19; 慢性疲労症候群

COVID19の後遺症が慢性疲労症候群/筋痛症性脳脊髄炎と呼ばれる症状に似ていることから、ウイルス感染後の慢性疲労症候群あるいは線維筋痛症の病態モデルとなることに着目した。本研究ではヒト線維芽細胞種SH-SY5Y細胞とヒトミグログリア細胞株HMC3細胞にSARS-CoV-2の主たる構成蛋白質であるspike proteinを遺伝子導入して発現させ、細胞障害を評価することを目的とした。SARS-CoV-2 Spike Gene plasmidをSino Biological社から入手し、plasmid prepにてplasmidを精製した。精製したplasmidをリポフェクチン (Promega, FuGENE HD) でトランスフェクションを行った。まずは神経系の細胞よりも、より発現しやすいHeLa細胞でトランスフェクションを試みた。トランスフェクション後24時間後と48時間後に細胞を回収して、spike protein抗体によるウエスタンブロットを行ったところspike proteinのバンドが検出され、トランスフェクションが成功したことが確認できた。またトランスフェクション後24時間後と48時間後のspike protein量を比較したところ、48時間後は24時間後の40倍濃いバンドが検出されたことから、HeLa細胞内でspike proteinが増殖されたことが確認できた。次回はSH-SY5Y細胞やHMCなどの神経細胞にトランスエクションして、神経細胞でもトランスフェクションができるのか、またspike proteinの増殖が観察されるのかを検討していく。

COVID-19 sequela chronic fatigue syndrome/painful spondylitis and respiratory symptoms like chronic fatigue syndrome after infection. In this study, we introduced SARS-CoV-2 main component protein into SH-SY5Y cell line and HMC3 cell line, and evaluated the effects of cell damage on SARS-CoV-2 expression. SARS-CoV-2 Spike Gene plasmid was prepared by Sino Biological. Fine Plasmid (Promega, FuGENE HD) The cells of the HeLa cell line were found to be very sensitive. It is confirmed that the cells were recovered 24 hours and 48 hours after the transfer, and the spike protein antibody was detected and the transfer was successful. After 24 hours and 48 hours, the spike protein levels were compared. After 48 hours, the spike protein levels were 40 times higher. After 24 hours, the spike protein levels in HeLa cells were confirmed. In the second stage, SH-SY5Y cells and HMC cells were examined for the growth of spike protein in neurons and neurons.