ウイルス感染症後遺症による神経炎症の分子機構の解明

阐明病毒感染后遗症引起神经炎症的分子机制

• 批准号: 22K16588
• 负责人: 神 久予
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16588/
• 关键词: SARS-CoV-2; spike protein; COVID-19; 慢性疲労症候群

COVID19の後遺症が慢性疲労症候群/筋痛症性脳脊髄炎と呼ばれる症状に似ていることから、ウイルス感染後の慢性疲労症候群あるいは線維筋痛症の病態モデルとなることに着目した。本研究ではヒト線維芽細胞種SH-SY5Y細胞とヒトミグログリア細胞株HMC3細胞にSARS-CoV-2の主たる構成蛋白質であるspike proteinを遺伝子導入して発現させ、細胞障害を評価することを目的とした。SARS-CoV-2 Spike Gene plasmidをSino Biological社から入手し、plasmid prepにてplasmidを精製した。精製したplasmidをリポフェクチン (Promega, FuGENE HD) でトランスフェクションを行った。まずは神経系の細胞よりも、より発現しやすいHeLa細胞でトランスフェクションを試みた。トランスフェクション後24時間後と48時間後に細胞を回収して、spike protein抗体によるウエスタンブロットを行ったところspike proteinのバンドが検出され、トランスフェクションが成功したことが確認できた。またトランスフェクション後24時間後と48時間後のspike protein量を比較したところ、48時間後は24時間後の40倍濃いバンドが検出されたことから、HeLa細胞内でspike proteinが増殖されたことが確認できた。次回はSH-SY5Y細胞やHMCなどの神経細胞にトランスエクションして、神経細胞でもトランスフェクションができるのか、またspike proteinの増殖が観察されるのかを検討していく。

COVID19 の sequela が chronic weakness 労 syndrome/muscle pains 脳 spinal marrow inflammation と shout ば れ に る symptoms like て い る こ と か ら, ウ イ ル ス infection after の syndrome of chronic weakness 労 あ る い は line d muscle pains の pathological モ デ ル と な る こ と に with mesh し た. This study で は ヒ ト line d bud cells of SH SY5Y cells と ヒ ト ミ グ ロ グ リ ア に SARS - CoV - 2 cell lines HMC3 cells の main た る constitutes protein で あ る spike protein を posthumous son 伝 import し て 発 now さ せ, cell handicap of を review 価 す る こ と を purpose と し た. SARS-CoV-2 Spike Gene plasmidをSino Biological society ら ら acquired を plasmid prepにてplasmidを refined た た Refined し た plasmid を リ ポ フ ェ ク チ ン (Promega, FuGENE HD) で ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を line っ た. ま ず は god 経 cell の よ り も, よ り 発 now し や す い HeLa で ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を try み た. ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン と 48 24 time after time after に cells を back 収 し て, spike protein antibody に よ る ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line っ た と こ ろ spike protein の バ ン ド が 検 out さ れ, ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン が successful し た こ と が confirm で き た. ま た ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン と 48 24 time after time after の spike protein quantity を compare し た と こ ろ, 48 は 24 time after time の 40 times strong い バ ン ド が 検 out さ れ た こ と か ら, HeLa で spike protein が raised colonization さ れ た こ と が confirm で き た. Time back to は SH SY5Y cells や HMC な ど の god 経 cells に ト ラ ン ス エ ク シ ョ ン し て, god 経 cell で も ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン が で き る の か, ま た spike protein の raised colonization が 観 examine さ れ る の か を beg し 検 て い く.