低分子ヘパリンの脊髄損傷に対する治療効果

低分子肝素对脊髓损伤的治疗作用

• 批准号: 22K16654
• 负责人: 伊藤 定之
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16654/
• 关键词: spinal cord injury; 脊髄損傷; 低分子ヘパリン

これまで研究代表者らがin vitroで合成オリゴHSによる軸索再生効果示した実験と同様の実験の候補として2種類の低分子ヘパリン(薬剤A、Bとする)を選定した。まず、Surface Plasmon Resonance法（SPR法）を用いて、薬剤A、BとCSとPTPRσとの関連を検討したAとBを比較したところ、AでよりCSとPTPRσの結合を分離する作用が認められた。次に、Isothermal Titration Calorimetry (ITC)で薬剤A、BとPTPRσとの反応性について検討したところ、Aでより高い結合性を認めた。また、研究代表者らが独自に作成したEGFRへのリン酸化をみることでPTPRσの細胞外の状態を判定可能にしたPTPRσの細胞外ドメインにEGFRの細胞内ドメインを結合させたキメラレセプターを用いて、Western Blotting(WB)でリン酸化を判定することで薬剤A、BがPTPRσを多量体にするかを検討したところ、AでよりPTPRσを多量体にすることが明らかとなった。さらに脱リン酸化酵素であるPTPRσはCSで活性化されることがわかっており、HEK293Tを用いてv-srcでリン酸化し、その上でPTPRσを用いて脱リン酸化させたモデルに薬剤A、Bを加えて、PTPRσの脱リン酸化作用に対する効果を検討したところ、AでPTPRσの脱リン酸化作用を抑制していた。次にコンドロイチン硫酸プロテオグリカン（CSPG）をコーティングした培地でマウスのDorsal Root Ganglion（DRG） cultureを行い、薬剤Aと共に培養すると通常であればCSPGを乗り越えて伸長出来ない軸索がCSPGを乗り越えて伸長していた。in vitroでは薬剤Aで合成オリゴHSによる軸索再生効果と同様の効果を認めた。今後はin vivoでの実験を行っていく予定である。

This study represents the selection of two types of low molecular weight compounds (A, B) in vitro synthesis, as well as in axonal regeneration. Surface Plasmon Resonance (SPR) method is used to analyze the relationship between A and B, CS and PTPRσ, and to compare the relationship between A and B and CS and PTPRσ. Isothermal Titration Calorimetry (ITC) is the most common method of determining the association between PTPRσ and A. In addition, the study representative independently prepared the determination of the extracellular state of PTPRσ, the determination of the extracellular state of PTPRσ, the determination of the intracellular state of EGFR, the determination of the extracellular state of PTPRσ, the determination of the intracellular state of EGFR, and the determination of the extracellular state of PTPR σ. PTPRσ is activated by HEK 293T with v-src, and PTPRσ is activated by HEK 293T with v-src. PTPRσ is activated by HEK 293T with v-src. PTPRσ is activated by HEK 293T with v-src. PTPR σ is activated by HEK 293T with v-src. The Dorsal Root Ganglion (DRG) culture of the second generation of CSPG is usually carried out in the same way as that of the third generation of CSPG. In vitro, the shaft regeneration effect and the same effect are recognized. In the future, we will continue to do so.