メカノレセプターTRPV4による椎間板変性に対する治療アプローチ

机械感受器TRPV4治疗椎间盘退变的方法

• 批准号: 22K16743
• 负责人: 武岡 由樹
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16743/
• 关键词: TRPV4; 椎間板髄核細胞; オートファジー; 細胞外基質代謝; 椎間板変性; 細胞外基質

本研究の目的は、ラット椎間板においてTransient receptor potential vanilloid-4 (TRPV4)の抑制および活性化が恒常性維持、すなわちオートファジーと細胞外基質代謝に与える影響を明らかにすることである。2022年度はラット尾椎椎間板髄核細胞を用いて細胞実験を行った。機能欠失実験ではTRPV4 siRNAをリバーストランスフェクション法で細胞に導入し、炎症刺激(IL-1β添加）条件下で、タンパクを抽出してオートファジーマーカーや細胞外基質同化因子・異化関連因子をウェスタンブロット法で評価した。TRPV4の抑制により、オートファジーの有意な抑制（p62/SQSTM1の低下とLC-IIの増加）と、細胞外基質同化因子（Aggrecan, Collagen type II, TIMP1, TIMP2）の有意な減少、異化関連因子（MMP3, MMP13）の有意な増加を認めた。また、TUNEL染色を用いた細胞生存率の評価では、TRPV4抑制により細胞生存率の有意な低下を認めた。機能獲得実験では、TRPV4アゴニストを添加して細胞を培養し、同様に炎症刺激条件も設けて、オートファジーと細胞外基質の評価をウェスタンブロット法で行った。炎症刺激下において、アゴニストによるTRPV4の活性化によりオートファジーマーカーの有意な増加を認め、細胞外基質同化因子の有意な増加と、異化関連因子の有意な低下を認めた。さらに、アポトーシスマーカーを評価し、アポトーシスの抑制（Cleaved PARP, Cleaved Caspase 9の低下とPARPの増加）が示された。

The purpose of this study is: Transient receptor potential vanilloid-4 (TRPV4) inhibits the activation and maintenance of homeostasis, and affects extracellular matrix metabolism and metabolism. In 2022, the caudal vertebrae intervertebral plate and nuclear cells were used for the research and development of the caudal vertebra intervertebral plate. Functional failure 実験ではTRPV4 siRNA をリバーストランスフェクション method is introduced into cells and under conditions of inflammatory stimulation (IL-1β addition), タンパクをExtraction of してオートファジーマーカーやExtracellular matrix anabolic factor and dissimilation-related factor をウェスタンブロット method で価した. Inhibition of TRPV4, intentional inhibition of p62/SQSTM1 (lowering of p62/SQSTM1, increase of LC-II), extracellular matrix anabolic factors (Aggrecan, Collagen type II, TIMP1, TIMP2)'s intentional reduction, alienation-related factors (MMP3, MMP13)'s intentional increase and recognition. The results of TUNEL staining and TUNEL staining were used to evaluate the cell survival rate, and TRPV4 inhibition showed that the cell survival rate was intentionally lowered. Function acquisition, TRPV4 addition, cell culture, and inflammation stimulation The conditions are as follows: けて, オートファジーと extracellular matrix の evaluation 価をウェスタンブロット method で行った. TRPV4 is activated under inflammatory stimulation, such as TRPV4 and TRPV4. There is an intentional increase in the amount of the extracellular matrix anabolic factor, an intentional increase in the extracellular matrix anabolic factor, and an intentional decrease in the dissimilation-related factor. Cleaved PARP, Cleaved Caspase 9の下とPARPのincrease)がshowされた.

项目成果

Transient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4) knockdown decreases extracellular matrix synthesis via autophagy suppression in rat intervertebral disc

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 敲低通过抑制大鼠椎间盘自噬减少细胞外基质合成

• 发表时间: 2023
• 作者: Tomoya Matsuo;Yoshiki Takeoka;Zhongying Zhang;Takashi Yurube;Kunihiko Miyazaki;Hiroki Ohnishi;Masao Ryu;Naotoshi Kumagai;Kohei Kuroshima;Yoshiaki Hiranaka;Ryosuke Kuroda;Kenichiro Kakutani
• 通讯作者: Kenichiro Kakutani

ラット椎間板においてTransient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4)がオートファジーと細胞外マトリクス合成へ与える影響

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 对大鼠椎间盘自噬和细胞外基质合成的影响

• 发表时间: 2023
• 作者: 松尾智哉;武岡由樹;張鍾穎;由留部崇;宮崎邦彦;大西洋輝;劉正夫;熊谷直利;黒島康平;平中良明;黒田良祐;角谷賢一朗
• 通讯作者: 角谷賢一朗

Transient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4) activation promotes autophagy and increases extracellular matrix synthesis through AMPK pathway in rat intervertebral disc cells

瞬时受体电位 Vanilloid 4 (TRPV4) 激活促进大鼠椎间盘细胞自噬并通过 AMPK 途径增加细胞外基质合成

• 发表时间: 2023
• 作者: Kohei Kuroshima;YoshikiTakeoka;Zhongying Zhang;Takashi Yurube;Kunihiko Miyazaki;Hiroki Ohnishi;Masao Ryu;Tomoya Matsuo;Naotoshi Kumagai; Yoshiaki Hiranaka;Ryosuke Kuroda;Kenichiro Kakutani
• 通讯作者: Kenichiro Kakutani